[发明专利]一种提高植物乳杆菌抑菌活性的培养方法

权利要求书

1.一种提高植物乳杆菌抑菌活性的培养方法，其特征在于，对实验菌株培养条件优化的单因素正交试验，步骤如下：

实验菌株的培养：以1％的接种量将培养过夜的菌液5mL接入MRS培养基，在30℃下培养36h后10000r/min离心5min，取发酵上清液作为待测样品；

大肠杆菌(指示菌)的培养：37℃下LB培养基120rpm培养过夜，最后测得值10⁷cfu/mL，放4℃冰箱冷藏保存备用；

a.培养条件优化

培养温度对产量的影响：分别将接种菌株的MRS培养基置于设定温度下培养36h，设置3个重复，测定发酵液的OD₆₀₀值及抑菌圈的大小；

培养基初始pH值对产量的影响：将MRS培养基的pH值分别调至一定比例；接种菌株30℃培养36h，设置3个重复，测定发酵液的OD₆₀₀值及抑菌圈的大小。

接种量对产量的影响：分别以一定比例的接种量接入MRS培养基，接种菌株30℃培养36h，设置3个重复，测定发酵液的OD₆₀₀值及抑菌圈的大小；

b.营养条件优化

不同碳源种类对产量的影响：分别采用2％的淀粉、蔗糖、麦芽、葡萄糖和乳糖取代MRS培养基中的葡萄糖；以1％接种量在30℃起始pH为6.5下培养36h，设置3个重复，测定发酵液的OD₆₀₀值及抑菌圈的大小；

不同氮源种类对产量的影响：分别选取1.5％酵母浸出粉、蛋白胨、胰蛋白胨、大豆蛋白胨和牛肉膏取代MRS培养基中的蛋白胨成分进行单因素试验，设置3个重复，测定发酵液的OD₆₀₀值及抑菌圈的大小；

吐温-80对产量的影响：配制含为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％浓度吐温-80的MRS培养基，以1％接种量在30℃起始pH为6.5下培养36h，设置3个重复，测定发酵液的OD₆₀₀值及抑菌圈的大小；

金属离子对抑菌活性的影响：选择加入0.02％的NaCl、MgCl₂、CaCl₂、MnCl₂、FeSO₄作为MRS培养基中的金属离子，起始pH6.5条件下培养，设置3个重复，将发酵上清液浓缩，并用中和法排除有机酸，30℃培养后测定发酵液的OD₆₀₀值及抑菌圈的大小。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正交试验确定发酵培养基的最佳组合为：依据初选中碳、氮源以及无机盐单因素试验的结果，选好的碳、氮源各1个，金属离子1个，采用分析软件设计3因素、3水平试验进行复选。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，a.培养条件优化，培养温度对产量的影响，所述设定温度为28℃、30℃、33℃、37℃、40℃。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，a.培养条件优化中，培养基初始pH值对产量的影响，所述将MRS培养基的pH值分别调至设定的比例为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，a.培养条件优化中，接种量对产量的影响，所述一定百分比1％、2％、3％、4％、5％。