[发明专利]一种TIM-3/CD28融合蛋白及所述融合蛋白修饰的CAR-T细胞

说明书

本发明具体涉及一种TIM‑3/CD28融合蛋白及所述融合蛋白修饰的CAR‑T细胞。现有CAR‑T细胞存在治疗效果不理想、持久性较差等缺陷，本发明为了提供一种治疗效果更优的CAR‑T细胞，设计了一种分子转换器T3/28，将TIM‑3抑制信号转换成CD28激活信号的，进一步提供了一种19BBz‑T3/28CAR‑T细胞。经验证，19BBz‑T3/28CAR‑T细胞进行免疫治疗，CAR‑T细胞的阳性率在40％‑70％之间，并且在体、内外具有理想的肿瘤杀伤能力。19BBz‑T3/28CAR‑T细胞可有效延长小鼠的生存期，还能够持续性清除不断回输的肿瘤细胞，具备持续抑制肿瘤的能力。

技术领域

本发明属于抗肿瘤免疫治疗技术领域，具体涉及一种TIM-3/CD28融合蛋白，及包含所述融合蛋白作为嵌合抗原抗体修饰的CAR-T细胞。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

CAR，即嵌合抗原受体技术，是依据肿瘤表面肿瘤相关抗原或者是肿瘤特异性抗原的表达情况，利用该抗原的相应抗体偶联一些共刺激分子对T细胞进行特殊的修饰，通过CAR修饰的T细胞对肿瘤细胞进行有效杀伤的技术。CAR-T的scFv识别的TAA不依赖于MHC，并且识别的分子可多样化。CAR的经典结构包括位于细胞内部的几个信号域，以及跨膜部分和细胞外起主要作用的抗原识别蛋白部分(通常为单链抗体scFv片段)。其中，scFv可以使T细胞选择性识别肿瘤细胞，与scFv相连的跨膜区一般来自CD8或者IgG4，CD3ζ信号分子的ITAM序列可以对T细胞进行有效的激活，提高杀伤功能。第一代CAR-T细胞胞内只有CD3ζ，仅具有部分持续性和杀伤能力，因此在临床患者体内并没有发生反应。二代CAR在一代CAR的基础上多了一个共刺激分子，比如OX40(CD134)、CD28、4-1BB(CD137)、CD27。共刺激信号分子的加入，促进了CAR-T细胞在体内的增殖与生存能力。单独的CD3ζ结构并不能够促进T细胞增殖和细胞因子的释放，不过在共刺激因子的协助下这一现象就会大大改善，二者协同可以激活CAR-T细胞信号，延长CAR-T细胞的生存期，提高CAR-T细胞的细胞毒性。与CD28相比，4-1BB能够增强CAR-T细胞的持久性功能，避免过早耗竭，不过使用CD28的CAR-T细胞比含4-1BB的CAR-T细胞具有更强的细胞因子释放能力。尽管CD28的CAR-T细胞初期具有强劲的增殖能力，但缺少持续性杀伤能力。第三代CAR-T疗法在CAR上增加了两个共刺激结构域，然而，一些研究表明多个共刺激结构域并不能增强T细胞功效。

近年来针对CD19抗原来治疗难治愈易复发的慢性淋巴细胞白血病(CLL)和急性淋巴细胞白血病(ALL)的CAR-T技术取得了很大的成功，目前针对CD19抗原的已经上市的CAR-T细胞产品已经获批了三种，分别是Kite(吉利德)的Yescarta、诺华的Kymriah和吉利德的Tecartus，临床数据显示总缓解率不低于80％。目前国内针对CD19靶点的临床试点较多，其CAR-T生产工艺与治疗方案参差不齐，存在复发率相当高的问题。另外由于CAR-T细胞毒性较弱，效果不明显和完全没反应的病例也非常多。所以需要对传统的二代CAR进行改造和优化，以便于解决CAR-T细胞毒性低、脱靶、特异性低下等问题。