[发明专利]一种定量检测人体血液中新冠病毒抗体的检测试剂盒、其检测方法

权利要求书

1.一种定量检测人体血液中新冠病毒抗体的检测试剂盒，其特征在于所述检测试剂盒包括免疫层析试剂条，免疫层析试剂条包括底衬、NC膜、样品垫一、样品垫二、释放垫和吸水纸；样品垫二、释放垫、样品垫一、NC膜和吸水纸从左至右依次搭接并组装在底衬上，样品垫一和吸水纸分别叠压在NC膜的左右两端，并在NC膜的表面形成检测区，在NC膜上设置靠近样品垫一的检测线T线和靠近吸水纸的控制线C线；释放垫右端再叠压在样品垫一的左端上，样品垫二再叠压在释放垫左端上；

将兔IgG偶联于羧基量子点微球，获得QM-兔IgG；将RBD抗体偶联于羧基量子点微球，获得QM-RBD抗体；

将所述QM-RBD抗体和所述QM-兔IgG混合后喷涂在免疫层析试剂条的释放垫上，并在T线区的NC膜上包被重组RBD抗原，C线区的NC膜上包被羊抗兔二抗GAR。

2.一种基于权利要求1所述的检测试剂盒定量检测人体血液中新冠病毒抗体的方法，其特征在于包括以下操作步骤：

1）制作标准曲线：以重组新冠病毒RBD的单克隆抗体为标准品，用pH缓冲液配制成一系列不同浓度的标准工作液，空白对照液为pH缓冲液；分别点样所述检测试剂盒的免疫层析试剂条，标准工作液或空白对照液滴入到免疫层析试剂条的样品垫一上，随后在样品垫二上滴入pH缓冲液作为层析推动液，层析一段时间后用干式荧光层析分析仪测定T线荧光值，以平均荧光值为纵坐标，标准品的浓度为横坐标绘制标准曲线，线性回归获得线性方程；

2）检测血液样品：将血液样品滴入到免疫层析试剂条的样品垫一上，随后在样品垫二上滴入pH缓冲液作为层析推动液，层析一段时间后用干式荧光层析分析仪测定T线荧光值，将测得的T线荧光值代入步骤1）的线性方程中，即可推算出血液样品中新冠病毒抗体的含量。

3.如权利要求2所述的定量检测人体血液中新冠病毒抗体的方法，其特征在于步骤1）或步骤2）中，所述pH缓冲液为pH=7.4的PBS缓冲液或者pH=6的MES 缓冲液。

4.如权利要求2所述的定量检测人体血液中新冠病毒抗体的方法，其特征在于步骤1）中，标准工作液或空白对照液取20~40ul，优选为30ul滴入到免疫层析试剂条的样品垫一上；在样品垫二上滴入pH缓冲液的体积为80~100ul，优选为90ul；层析时间为12~20min，优选层析时间为15min后用干式荧光层析分析仪测定T线荧光值。

5.如权利要求2所述的定量检测人体血液中新冠病毒抗体的方法，其特征在于步骤2）中，血液样品的测样体积为20~40ul，优选为30ul；在样品垫二上滴入pH缓冲液的体积为80~100ul，优选为90ul；层析时间为12~20min，优选层析时间为15min后用干式荧光层析分析仪测定T线荧光值。

6.如权利要求2所述的定量检测人体血液中新冠病毒抗体的方法，其特征在于步骤2）中，所述血液样品为全血、血浆或血清；当血液样品为全血或血浆时，血液样品用pH缓冲液稀释至原来体积的3-5倍，然后用于测样。

7.如权利要求1所述的一种定量检测人体血液中新冠病毒抗体的检测试剂盒，其特征在于所述羧基量子点微球为表面具有羧基功能团的量子点荧光微球，所述QM-兔IgG或QM-RBD抗体的制备过程为：用EDC/NHS交联剂活化，将兔IgG或RBD抗体共价交联于量子点荧光微球，多余的火花基团用BSA和甘氨酸封闭获得量子点荧光标记的兔IgG或RBD抗体。

8.如权利要求7所述的一种定量检测人体血液中新冠病毒抗体的检测试剂盒，其特征在于所述QM-兔IgG或QM-RBD抗体的具体制备步骤如下：

S1微球缓冲体系调整：将浓度为 20mmol/L、pH=6的MES缓冲液与浓度为1μmol/L的羧基量子点微球溶液按照1:1的体积比混合稀释，获得微球缓冲体系；

S2微球活化：将浓度为20mg/ml EDC-HCl溶液和浓度为20mg/ml NHS溶液按照1:1的体积比快速混匀后，37℃反应15min，8000g离心20min，弃上清，沉淀用步骤S1制得的微球缓冲体系重悬；

S3抗体偶联微球：步骤S2微球活化后，立即加入兔IgG或RBD抗体，迅速混匀，37℃反应1h；

S4洗涤和封闭：加入20μL封闭剂，混匀，37℃反应0.5h，8000g离心15min，弃上清，沉淀用缓冲液重悬、分散，即偶联完成。