[发明专利]一种重组仙台病毒样颗粒的纯化方法及其应用

权利要求书

1.一种重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、细胞裂解：收集包含有重组仙台病毒样颗粒的细胞，加入细胞裂解液，经破碎后，得到细胞裂解液；

S2、离子交换层析：使用阴离子交换层析柱，对步骤S1中得到的细胞裂解液进行纯化，得到初级提取液；

S3、羟基磷灰石层析：使用羟基磷灰石层析柱，对步骤S2中得到的初级提取液进行纯化，得到中级提取液；

S4、亲和层析：使用亲和层析柱，对步骤S3中的得到的中级提取液进行纯化，得到重组仙台病毒样颗粒。

2.如权利要求1所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，步骤S1中，所述细胞裂解液的组分如下：50mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)、150mM NaCl、1％TritonX-100、0.5％SDS、0.5％脱氧胆酸盐、4％β-巯基乙醇和1mM EDTA。

3.如权利要求1所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，步骤S1中，细胞破碎采用高压均质的方法进行，具体条件如下：在800～900bar的条件下破碎细胞4～6次。

4.如权利要求1所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，步骤S2中，所述阴离子交换层析柱选自Capto-DEAE阴离子交换柱或Capto-Q阴离子交换柱中的一种。

5.如权利要求4所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，步骤S2中，所述细胞裂解液进行纯化的具体方法如下：采用50mM Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)平衡4～8个柱体积后上样，之后加入pH为7.0～9.5的50mM Tris-HCl缓冲液(含有250～400mM NaCl)进行洗脱，得到初级提取液。

6.如权利要求1所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，步骤S3中，所述羟基磷灰石层析柱为陶瓷羟基磷灰石层析柱(CHT TypeⅡ)。

7.如权利要求6所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，所述初级提取液进行纯化的具体方法如下：采用20mM PBS缓冲液(pH 7.5)平衡5～10个柱体积后上样，之后加入50～150mM PBS缓冲液(pH为8.0～9.5)进行洗脱，得到中级提取液。

8.如权利要求1所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，步骤S4中，所述亲和层析柱为Benzamidine Focurose 6B亲和层析柱。

9.如权利要求8所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，所述中级提取液进行纯化的具体方法如下：采用pH为7.4的50mM Tris-HCl缓冲液(含有500mM NaCl)平衡5～10个柱体积后上样，之后加入洗脱液(50mM Tris-HCl缓冲液、500mM NaCl、20mM对氨基苯甲脒，pH 7.4)进行洗脱，得到重组仙台病毒样颗粒。

10.权利要求1～9任一项所述的重组仙台病毒样颗粒的纯化方法在制备HIV疫苗中的应用。