[发明专利]一种单克隆抗体及其在疾病诊断和检测中的应用

说明书

本发明涉及一种单克隆抗体及其在疾病诊断和检测中的应用。本发明通过采用杂交瘤方法制备并获得了针对肝素的单克隆抗体，所述抗体具有较好的特异性以及灵敏度，其可以用于血液样品中肝素的含量的测定，具有较好的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，更具体的涉及一种单克隆抗体及其在疾病诊断和检测中的应用。

背景技术

肝素首先从肝脏发现而得名，由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂，平均分子量为15KDa，呈强酸性。它也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中，是动物体内一种天然抗凝血物质。天然存在于肥大细胞，现在主要从牛肺或猪小肠黏膜提取。作为一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。临床上主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等。随着药理学及临床医学的进展，肝素的应用不断扩大。

在目前的研究中，针对肝素的检测变得尤为重要。比如尿路移行上皮细胞表面被葡萄糖氨基聚糖(glycccmminoglycans，GAGs)所覆盖，使上皮细胞免受病原体、微晶体、蛋白、致癌因子所粘附，肝素是GAGs的主要成分之一，尿中排泄的肝素主要为GAGs分解脱落产生，因此尿中肝索的排泄量与膀胱肿瘤、感染等疾病可能有一定关系。

测定肝素制剂含量的第一个方法是1924年Howell建立的，其根据是对新鲜全血凝结的抑制作用。这种全血法的修正是将血加硫酸钠保存，并加牛脑凝血活素，后为英国药典采用为法定方法，1938年Reiner和Winterstein的方法，用柠檬酸盐化的羊血浆来测定重钙化后肝素对凝结时间效应，最终为美国药典采用为法定方法日。目前各国药典收载的肝素效价测定方法均是生物检定法，均应用其抗血凝的药理作用进行测定，具体方法则有所不同。如英国药典(1980)、日本药局方(用硫酸钠一牛全血法、英国药典(1980)还规定可用硫酸钠一牛全血浆、枸橼酸钠一羊血浆法(英国药典1983、1986增补本已将肝素的效价测定改为此法)用平行线测定。美国药典(USP)从2l版开始则用羊血浆移位均值法测定。中国药典(1977)用家兔全血法，(1985)、(1990)、(1995)、(2000)用家兔全血法或兔、猪血浆法。

声色底物法是目前常用的检测方法。肝素的生色底物测定，近年来发展较快。用生色底物的光度法测定肝素是1976年由Teien等首先提出，1980年Tastad、1984年TenCate等阐述了以S-2222检测肝素的改革方法。到目前普遍用于肝素测定的生色底物法有两种。其一种是由Teien法发展起来的，原理为测定抗凝血酶一肝素复合物对X仅因子抑制作用。此法于试验体系中加入外源性抗凝血酶，在抗凝血酶存在下，肝素具有增强的抗凝活性，此活性直接针对一些凝结因子，其中X仪因子和凝血酶最为突出，因此这两种酶可用于测定肝素活性。方法之二是由Bartl和Lill于1979年发展起来的，其原理是测定AT-Ⅲ·肝素对凝血酶的抑制作用，即用凝血酶和底物ChromozymTH测定肝素活性。上述两种用生色底物测定肝素的试剂供应，国外已商业化。生色底物法的最大优点是其在肝素效应测定中的特异性，因而广泛用于肝素治疗的监测和肝素性质的研究。光度法使用，使常规测定的自动化得以实现，这对临床监测也是很重要的。

但是目前，针对肝素的检测方法还不够多，开发不同的检测思路变得迫在眉睫。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。单克隆抗体由于纯度高、特异性强、可以提高各种血清学方法检测抗原的敏感性及特异性。因此，开发肝素特异性的单克隆抗体及其检测方法变得尤为重要。

发明内容

本发明克服现有技术的缺陷，提供了一种采用生物法来检测血液中肝素含量的方法。

一方面，本发明提供一种特异性针对肝素的单克隆抗体。