[发明专利]猫爪草及其制剂特征图谱及其构建方法和猫爪草及其制剂的含量测定方法

说明书

本发明属于中药检测技术领域，具体提供了猫爪草及其制剂特征图谱及其构建方法和猫爪草及其制剂的含量测定方法，所述猫爪草及其制剂特征图谱的构建方法中，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含醋酸的水溶液和乙腈为流动相，梯度洗脱，经大量实验筛选得到特定的洗脱程序，在该程序下得到4个共有特征峰，并实现了这些共有特征峰的很好分离，得到的特征图谱的特征峰分离度高，峰形好，基线平稳，测定成分可实现完全分离，为猫爪草及其制剂的质量检测和控制提供依据，实现对猫爪草及其制剂整体成分表征，方法操作简单，能适用于猫爪草不同的制剂类型的质量控制。

技术领域

本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种猫爪草及其制剂特征图谱及其构建方法和猫爪草及其制剂的含量测定方法。

背景技术

猫爪草为毛莨科植物小毛莨兰Ranunculus ternatus Thunb.的干燥块根，其味甘、辛，性温，归肝、肺经，具有化痰消肿,解毒散结之功效，用于瘰疬痰核,疔疮肿毒,蛇虫咬伤。近年来,猫爪草及其制剂在治疗肺结核、淋巴结核和多种癌症及淋巴瘤,取得一定疗效,已成为国家重点发展的三类药材之一。猫爪草的化学成分主要涉及挥发油、内脂类、甾醇类、不饱和脂肪酸、微量元素、多糖、氨基酸等。传统医学认为猫爪草具有化瘀散结、消肿解毒、抗菌、抗病毒的功效。主治淋巴结核等疾病。

近年来，国内外医药工作者对猫爪草的研究，尤其是在猫爪草制剂的质量控制方面研究比较简单。《中国药典》2015年版、2020年版一部项下猫爪草标准项下并无关于猫爪草的含量测定项和特征谱图项，仅采用简单的薄层鉴别和浸出物等检查项目，无高效液相色谱法对其单一指标成分含量和特征图谱进行质量控制的方法，不能实现对猫爪草产品整体质量进行准确描述和评价。

目前有文献研究报道了采用气相色谱法建立猫爪草中挥发性成分的指纹图谱，所研究的内容仅针对猫爪草药材中的一类成分，且此类成分并非猫爪草中所含有的大类成分，含量较低(参见于生等，《猫爪草药材顶空气相色谱指纹图谱研究》，治法方药，第47页-48页)。另有研究报道过采用HPLC 液相色谱法测定猫爪草中吡咯丁酸的含量，然此研究中的吡咯丁酸为实验室自制成分，不易推广(参见应弘梅等，《猫爪草中吡咯丁酸的含量测定研究》，中国药杂志，2012,02,101-103)。

于生等发表的《中药猫爪草指纹图谱分析方法的研究》，建立了猫爪草药材指纹特征图谱的共有模式，方法下尿苷峰和腺苷峰均无法良好分离，在指纹图谱中未见对照品参照峰，无法对特征峰进行准确定位，不能充分的反映猫爪草药材的整体性和特征性，而且研究发现该方法不适用于猫爪草制剂的检测，用于检测猫爪草配方颗粒时，峰形差，峰高低，分离度低，检测效果不佳。

发明内容

因此，本发明的目的在于解决现有技术中猫爪草指纹图谱的构建方法得到的指纹图谱的准确性较低、分离度不佳以及无法适用于检测猫爪草制剂的问题，提供了一种猫爪草及其制剂特征图谱及其构建方法和猫爪草及其制剂的含量测定方法。

具体的，本发明公开了猫爪草及其制剂特征图谱的构建方法，包括以下步骤，

(1)猫爪草供试品溶液的制备；

(2)取猫爪草供试品溶液采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含醋酸的水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0→18分钟→30分钟→43分钟→54 分钟→62分钟，流动相中乙腈的体积百分比为0％→0％→1％→3％→16％→18％。

根据本发明任一项所述的构建方法，其中，步骤(1)包括：

1)称取猫爪草供试品，加溶剂提取，得到提取液；

2)将提取液固液分离，取液体，即为供试品溶液。

根据本发明任一项所述的构建方法，步骤(1)满足A-C中任意一项或者多项：