[发明专利]戊二酸尿症1型检测装置、尿液有机酸含量检测方法及其应用

权利要求书

1.一种尿液有机酸含量检测方法，其特征在于，包括：

建立待检测有机酸的标准曲线，所述待检测有机酸包括：戊二酸、3-羟基戊二酸以及戊烯二酸；

确定所述待检测有机酸的特征离子；

去除尿液样品中的尿素；

对所述尿液样品进行肟化反应；

在所述肟化反应后，萃取所述尿液样品中的有机酸；

使用氮气吹干萃取液，获得有机酸样本；

对所述有机酸样本进行硅烷化反应；

通过气相色谱-质谱联用法，定量检测所述有机酸样本中待检测有机酸的含量；其中，质谱的扫描模式为“单离子检测”的特征离子扫描模式。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述去除尿液样品中的尿素，具体包括：

取1ml尿液样品；

在所述尿液样品中，加入40ul尿素酶并充分震荡；

在37℃的条件下，静置30分钟；

加入960ul超纯水定容至2ml。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述对所述尿液样品进行肟化反应，具体包括：

向定容至2ml的尿液样品加入1ml，5％盐酸羟胺并充分摇匀；

在20-26℃的温度下，反应20分钟；

加入550ul纯盐酸后密封、避光保存直至检测到pH值为3。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述萃取所述尿液样品中的有机酸，具体包括：

向所述肟化反应后的尿液样品加入3ml乙酸乙酯并振荡混匀；

在振荡混匀后，以预设的离心转速进行离心；

获取离心后的上清液。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述萃取所述尿液样品中的有机酸，具体包括：

对所述肟化反应后的尿液样品进行两次或以上的离心萃取操作；

合并每次离心萃取操作获得的上清液。

6.根据权利要求4或5所述的检测方法，其特征在于，所述对所述有机酸样本进行硅烷化反应，具体包括：

在氮气吹干后的有机酸样本中加入100ul硅烷化试剂，在恒温70℃下，反应30分钟；所述硅烷化试剂为BSTFA:TMCS(99:1)。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱的工作条件具体如下：

进样方式：分流模式；

分流比：10:1

进样口温度：280℃；

升温程序：140℃保持1分钟，以6℃/分钟的升温速率升至200℃，保持2分钟；

流量控制模式：恒线速度。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述质谱的工作条件具体如下：

离子源温度：200℃；

接口温度：280℃；

采样方式：单离子检测；

间隔：0.30s；

扫描速度：1000；

采集质荷比：261；158；259；230；349；259。

9.如权利要求1-8任一项所述的尿液有机酸含量检测方法在戊二酸尿症1型检测中的应用。

10.一种戊二酸尿症1型的检测装置，其特征在于，包括：

存储器，用于存储记录，戊二酸、3-羟基戊二酸以及戊烯二酸的标准曲线；

样品处理试剂盒，包括若干种试剂，所述样品处理试剂盒用于：去除尿液样品中的尿素；对所述尿液样品进行肟化反应；在所述肟化反应后，萃取所述尿液样品中的有机酸；使用氮气吹干萃取液，获得有机酸样本；对所述有机酸样本进行硅烷化反应；

气相色谱-质谱设备，用于通过气相色谱-质谱联用法，定量检测所述有机酸样本中待检测有机酸的含量；

其中，质谱的扫描模式为“单离子检测”的特征离子扫描模式。