[发明专利]一种同步测定血液中多种多环芳烃的方法及应用

说明书

本发明公开了一种同步测定血液中多种多环芳烃的方法及应用，该方法包括如下步骤：S1.样品采集；S2.超声提取和冷冻离心；S3.SPE萃取；S4.浓缩、复溶；S5.上机，将浓缩液用气相色谱‑串联质谱法检测，或采用气相色谱质谱联用仪检测，分析检测结果，计算得到血液样品中多种多环芳烃的各具体成分的浓度。本发明还公开了该方法在用于构建动物试验模型及特定人群内暴露的健康风险评估的应用。本发明采用小体积血液样本，通过冷冻离心消除液液萃取中乳化现象，并通过SPE净化，对样本进行提取、纯化和浓缩，测定全血样品中PAHs的含量，对开展多种多环芳烃在生物体内的代谢、转运、合成和损伤研究具有重要意义。

技术领域

本发明涉及复杂基质生物样品中有机污染物检测技术领域，具体涉及一种同步测定血液中多种多环芳烃的方法及应用。

背景技术

多环芳烃PAHs是一类由两个或两个以上苯环或环戊二烯稠合而成的高分子有机物，是一类由有机物质的不完全燃烧或高热分解产生的具有多种生物学毒性的有机污染物，广泛存在于空气、水、食物和土壤中。由于其具有高生物活性、持久性、脂溶性等特点，且物理化学性质稳定，在自然环境中难以降解，是持久性有机污染物。多环芳烃可通过食物、呼吸、甚至皮肤接触进入人体内，对人类的健康造成危害，研究表明PAHs具有较强的致畸、致癌和致突变性，与早产、胎儿生长受限等不良妊娠结局有关。在内暴露研究中，多以PAH-DNA加合物、尿中1一羟基芘作为暴露指标，以血液中的 PAHs作为暴露指标的研究较少，主要是因为直接采集人体血液难度较大，且血液基质复杂，含有大量的蛋白、糖类、脂类和水分，尤其是全血中含有红细胞、白细胞、血小板等物质，背景干扰严重，而污染物浓度多为微量和痕量水平，这些都是样品前处理及直接检测的巨大挑战。

目前血液样品的前处理方法主要有液液萃取法和固相萃取法，液液萃取法就是用有机溶剂直接提取，该法操作简单，但多用于血清或者血浆中，不适合基质更为复杂的全血；固相萃取技术（SPE）是血液样品应用比较广泛的方法，由于PAHs是半挥发性有机物，在样品前处理及检测过程中容易散失，导致上述方法的样本剂量均较大，多为2-10ml，增大了获取难度，特别是对于大鼠等小型试验动物而言，不利于开展各种动物试验。

例如，现有技术中，为了解决血液中多环芳烃等成分的检测问题，中国发明专利申请号CN202011171172 .7公开了一种血液中半挥发性有机物的检测方法，该方法是先进行多级萃取；然后进行固相净化；接着再进行气相色谱质谱联用仪分析；最后计算各个待测目标半挥发性有机物的浓度。该发明通过对方法整体工艺流程设计进行改进，先对待测样品采用特定的前处理，再对前处理后的样品采用气相色谱质谱联用仪多反应监测模式进行检测，对血液中具有代表性的邻苯二甲酸酯、多环芳烃、多溴二苯醚、多氯联苯和农药等多种半挥发性有机物进行检测。

但是，该发明提供的检测方法所采用的多级萃取过程复杂、使用的样品剂量和溶剂多，且其检测对象为血清或血浆样品而不是全血，在处理过程中会损失部分多环芳烃的含量；在其超声、振动萃取、离心等处理过程中，样品的温度会快速升高、造成多环芳烃等检测目标成分的挥发，影响检测结果的准确性；同时，由于全血中包括各种血细胞、基质复杂，其在前处理过程中容易堵塞萃取柱，且在洗脱液中会残留血液中的水分，不利于后续氮吹。

因此，现有的多环芳烃的检测方法，均不能适用于将全血直接作为检测样品；在样品处理过程中容易造成多环芳烃的挥发，导致检测结果不准确。

发明内容

为克服现有技术所存在的上述不足之处，本发明的目的在于，提供一种同步测定血液中多种多环芳烃的方法，采用小体积样本，通过冷冻离心和减少SPE萃取前处理步骤，对样本进行提取、纯化和浓缩，避免多环芳烃的损失，以准确测定血样品中PAHs的含量。

本发明还提供了将该方法用于构建动物试验模型及进行内暴露健康风险评估的应用。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：

一种同步测定血液中多种多环芳烃的方法，其特征在于，其包括如下步骤：