[发明专利]一种同步测定血液中多种多环芳烃的方法及应用

权利要求书

1.一种同步测定血液中多种多环芳烃的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

S1. 样品采集

用装有抗凝剂的采血管采集新鲜血液后充分摇匀，取不少于500ul于聚四氟离心试管中，制得血样样品；

S2.超声提取和冷冻离心

S2.1按血样样品：溶剂体积比设定的比例，向样品中加入正己烷，充分振摇后，冰浴下超声提取；

S2.2将提取液放于冰箱中至基质层冷冻到-18℃--20℃，再放于离心机上离心，分离出上清液，得到第一次提取液；

S2.3 将S2.2的上清液移至新试管中，再向血样中加入3.0mL正己烷，重复上述S2.2的离心操作，将上清液取出、得到第二次提取液，与第一次提取液合并；

S3.SPE萃取

S3.1 SPE活化

依次用甲醇和超纯水活化SPE小柱，保持小柱湿润；

S3.2 上样

将合并后的正己烷萃取液缓缓倒入SPE小柱上，并确保萃取液中组分与SPE小柱充分键合；待萃取液流净后，增加压力，继续抽提；

S3.3 洗脱

用V/V=1：1的正己烷和二氯甲烷的混合溶剂，洗脱SPE小柱，收集洗脱液；

S4. 浓缩、复溶

将洗脱液氮吹至干燥，再用100ul溶剂复溶，制得浓缩液：其中，气相色谱用含内标的正己烷作为溶剂复溶，液相色谱用乙腈作为溶剂复溶；

S5. 上机

将浓缩液用气相色谱-串联质谱法检测，或采用气相色谱质谱联用仪检测，分析检测结果，计算得到样品中多种多环芳烃的各具体成分的浓度。

2.根据权利要求1所述的同步测定血液中多种多环芳烃的方法，其特征在于，

所述步骤S1中的样品采集步骤，采集新鲜血液的对象为小型试验动物或人体；其采集量不少于500ul。

3.根据权利要求1所述的同步测定血液中多种多环芳烃的方法，其特征在于，

所述S2超声提取和冷冻离心的步骤，具体为：

S2.1按血样样品：溶剂体积比=1:6的比例，向样品中加入正己烷，充分振摇后，冰浴下超声提取40min；

S2.2将提取液放于冰箱中至基质层冷冻到-18℃--20℃，再放于离心机上4500rpm离心10min，分离出上清液，得到第一次提取液；

S2.3 将S2.2的上清液移至新试管中，再向血样中加入3.0mL正己烷，重复上述S2.2的离心操作，将上清液取出、得到第二次提取液，与第一次提取液合并。

4.根据权利要求1所述的同步测定血液中多种多环芳烃的方法，其特征在于，

所述S3.SPE萃取的步骤，具体为：

S3.1 SPE活化

依次用1.0ml甲醇和1.0ml超纯水活化SPE小柱，保持小柱湿润；

S3.2 上样

将合并后的正己烷萃取液缓缓倒入SPE小柱上，为确保萃取液中组分与SPE小柱充分键合，控制压力开关和限流阀，使流速保持在2ml/min；待萃取液流净后，增加压力，继续抽提2min；

S3.3 洗脱

用V/V=1：1正己烷和二氯甲烷的混合溶剂6.0mL，洗脱SPE小柱，收集洗脱液。

5.根据权利要求1-4之一所述的同步测定血液中多种多环芳烃的方法，其特征在于，

所述S1还包括如下步骤：

S1.1 预先选定的同步测定的血液中多种多环芳烃成分为18种，其分别为：1：萘；2 ：苊烯；3 ：苊；4 ：芴；5 ：菲；6 ：蒽；7 ：芘；8 ：荧蒽；9 ：䓛；10 ：苯并［a］蒽；11 ：苯并［j］荧蒽；12 ：苯并［b］荧蒽；13 ：苯并［k］荧蒽；14 ：苯并［a］芘；15 ：苯并［e］芘；16 ：二苯并［a，h］蒽；17 ：茚并［1，2，3-cd］芘；18 ：苯并［g，h，i］苝；

S1.2 根据预先选定的多环芳烃成分，向血样样品中加入萘-d8，苊-d10，菲-d10，䓛-d12，苝-d12，5种内标储备液200mg/L或以上浓度，持证标准溶液；色谱纯正的己烷、二氯甲烷；对所述的步骤S2-S5进行全程序质控，使得到5种氘代内标的回收率处于72%-112%之间。