[发明专利]含（7aS,2’S）-2-氧-氯吡格雷的血浆样品的处理方法及测定方法

权利要求书

1.一种含(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷的血浆样品的处理方法，其特征在于，所述处理方法包括：取含(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷的全血，加入还原剂，收集血浆，即得。

2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述还原剂为蛋白还原剂；优选地，所述还蛋白还原剂为二硫苏糖醇、三(2-羧乙基)膦、2-巯基乙醇中的至少一种，更优选为三(2-羧乙基)膦；

优选地，血浆中还原剂的浓度为10～100mg/ml。

3.一种血浆中(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷的测定方法，其特征在于，采用权利要求1或2所述的处理方法处理待测样品。

4.根据权利要求3所述的一种血浆中(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷的测定方法，其特征在于，采用LC/MS/MS测定，所述测定方法包括以下步骤：

S1.全血处理：取全血，加入还原剂溶液，离心，收集血浆；

S2.血浆样品预处理：向血浆中加入蛋白沉淀剂和内标工作液，涡旋后离心，并取上清；

S3.LC/MS/MS测定：将S2得到的上清注入超高效液相色谱串联质谱测定，其中，液相色谱条件包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动A，甲酸水溶液为流动相B，按以下规定梯度洗脱：

0min，5～15％A，85～95％B；

2min，50～60％A，40～50％B；

5min，50～60％A，40～50％B；

6min，85～95％A，5～15％B；

8min，85～95％A，5～15％B；

8.5min，5～15％A，85～95％B；

10min，5～15％A，85～95％B；

质谱条件包括：采用二级质谱检测器，电喷雾离子源，正离子多反应监测模式，(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷m/z 338.100→155.000，内标m/z 341.100→158.000，碰撞能为18～22eV，优先为20eV。

5.根据权利要求4所述的一种血浆中(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷的测定方法，其特征在于，所述蛋白沉淀剂包括甲醇或/和乙腈；

优选地，所述S2中，加入1～6倍血浆体积的蛋白沉淀剂；更优选为3倍体积。

6.根据权利要求5所述的一种血浆中(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷的测定方法，其特征在于，所述内标工作液为(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷-d₃甲醇溶液；

优选地，内标工作液的浓度为10～50ng/ml；

优选地，每100μl血浆中加入内标工作液1～10μl；优选地，所述甲酸溶液的体积浓度为0.05～0.2％。

7.根据权利要求4所述的一种血浆中(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷的测定方法，其特征在于，按以下规定梯度洗脱：

0min，10％A，90％B；

2min，55％A，45％B；

5min，55％A，45％B；

6min，90％A，10％B；

8min，90％A，10％B；

8.5min，10％A，90％B；

10min，10％A，90％B。

8.根据权利要求7所述的一种血浆中(7aS,2’S)-2-氧-氯吡格雷的测定方法，其特征在于，流动相流速为0.1～0.4ml/min，优选为0.2ml/min；柱温为30～50℃，优选为40℃。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述S1的操作过程为低温条件下操作，优选地，置于冰上操作。

10.根据权利要求4脱溶剂气温度和源温度分别为400℃和150℃。