[发明专利]一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法

权利要求书

1.一种诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)在无菌条件下采集获取动物细胞；

(2)将步骤(1)中获得的动物细胞所述进行传代培养；

(3)将步骤(2)步获得的传代细胞调整细胞浓度为2-4×10⁶，溶解于生理盐水中，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为7：4，于-85℃冰箱中冷冻至完全冻结，后置于38℃温度条件下加热，完成冻融操作，离心获得细胞悬液X1和沉淀X1，收集细胞悬液X1，获得初步裂解物；

(4)向步骤(3)步获得的沉淀X1中加入含有体积浓度为0.15％的动物细胞裂解液的生理盐水，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量质量(g)的比例为7：4，于振幅为25％、5℃的超声条件下超声处理，离心获得细胞悬液X2和沉淀X2，收集细胞悬液X2，获得深度裂解物，弃去沉淀B；

(5)将步骤(3)步获得的细胞悬液X1和步骤(4)步获得的细胞悬液X2分别用生理盐水溶解并混合，所用生理盐水的体积(ml)与步骤(2)步中动物细胞质量(g)的比例为1：1，获得细胞裂解液；

(6)将步骤(5)步获得的细胞裂解液与诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合，得到混合裂解液；

(7)将步骤(6)获得的最终混合裂解液用于人体组织损伤修复再生。

2.根据权利要求1所述的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，其特征在于，步骤(1)中，所述动物细胞为自体细胞。

3.根据权利要求1所述的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，其特征在于，所述步骤(2)步中，将步骤(1)中获得的动物细胞传代培养至P3代细胞。

4.根据权利要求1所述的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，其特征在于，将所述步骤(3)步中的冻融操作重复3-5次。

5.根据权利要求1所述的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，其特征在于，所述步骤(3)步中的冻融操作的加热时间为18-24min。

6.根据权利要求1所述的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，其特征在于，所述步骤(3)步中的超声处理的时间为8-12min。

7.根据权利要求1所述的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，其特征在于，步骤(6)中，所述混合裂解液中诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶的浓度为0.004-0.008μg/mL。

8.根据权利要求1所述的诱导脐带血中的TIMP2蛋白酶与细胞裂解液的修复再生方法，其特征在于，步骤(6)中，所述混合裂解液中NP-40裂解液体积百分比浓度为2-6％。