[发明专利]SmcL单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其应用和竞争ELISA检测方法

说明书

本发明提供了一种SmcL单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其应用和竞争ELISA检测方法，该单克隆抗体由保藏于中国典型培养物保藏中心的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生，保藏编号为CCTCC NO:C2021175。本发明的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有效价高、特异性好、与天然抗原亲和力较强的优势。基于此抗体建立的伊氏李斯特菌SmcL单抗竞争ELISA检测方法，灵敏度高，稳定性良好，与其它病原菌无交叉反应，能有效检测羊临床血清中SmcL抗体的水平，并可用于伊氏李斯特菌流行病学调查及临床免疫监测。

技术领域

本发明涉及生物技术检测技术领域，尤其涉及一种SmcL单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其应用和竞争ELISA检测方法。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)和伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii)是李斯特菌属的主要致病菌，能引起人和动物的李斯特菌病。其中伊氏李斯特菌主要感染反刍动物，导致牛羊的暴发性流产，给养殖业带来巨大的经济损失。近年来也出现了伊氏李斯特菌引起人胃肠炎、败血症的病例报道，需引起高度重视。

加强对养殖环节李斯特菌病的监测，能够在农场阶段发现感染动物并及时采取措施，从而防止患病家畜进入食品产业链，对公共卫生安全具有重要意义。李斯特菌病诊断的“金标准”是病原菌的分离。该方法耗时长，且由于活菌存在时间短和不定时排菌等原因，往往导致检测结果不准确。血清学检测方法常用于感染性疾病的辅助诊断，是对传统细菌分离培养方法的补充和支持。其中ELISA方法具有操作简便、速度快、能够高通量筛选大批量样品的优势，在动物流行病学调查及临床免疫监测中广泛使用。目前，已有用于检测李斯特菌病的商品化诊断试剂盒，是基于李斯特菌溶血素O(Listerolysin,LLO)的间接ELISA方法，该试剂盒无法区分单核细胞增生李斯特菌和伊氏李斯特菌引起的感染。迄今为止，尚未有针对伊氏李斯特菌感染的血清学检测方法的报道。

发明内容

本发明旨在解决现有技术中存在的技术问题。为此，本发明提供一种SmcL单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其应用和竞争ELISA检测方法，目的是实现对伊氏李斯特菌的有效检测，且杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有效价高、特异性好、亲和力高、与天然抗原亲和力较强的优势。

基于上述目的，本发明提供了一种分泌伊氏李斯特菌SmcL单克隆抗体的杂交瘤细胞株，于中国典型培养物保藏中心保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021175，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏时间为2021年7月8日，分类命名为：杂交瘤细胞株6E10。

本发明还提供一种伊氏李斯特菌的SmcL单克隆抗体，由所述的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。该SmcL单克隆抗体用于检测伊氏李斯特菌。

所述单克隆抗体包括重链和轻链，所述轻链包括氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示的三个互补决定区；所述重链包括氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4-6所示的三个互补决定区。

优选的，所述轻链的全长氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述重链的全长氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。

本发明还提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码所述单克隆抗体。

优选的，所述多核苷酸中编码轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述多核苷酸中编码重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

本发明还提供所述单克隆抗体在检测伊氏李斯特菌的检测试剂或试剂盒中的应用。

本发明还提供一种用于检测伊氏李斯特菌的试剂盒，所述试剂盒包括酶标抗体，所述酶标抗体为不限于辣根过氧化物酶标记的伊氏李斯特菌SmcL单克隆抗体。