[发明专利]一种人乳头瘤病毒HPV16型E7活性蛋白的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种人乳头瘤病毒HPV16型E7活性蛋白的制备方法及应用，通过对HPV16型E7蛋白的已知编码基因进行密码子优化，得到了如SEQ ID NO.1所示的HPV16型E7蛋白编码基因，并利用大肠杆菌发酵系统进行体外表达，从而显著提高了目的蛋白的溶解性，使其表现为可溶性蛋白，避免目的蛋白以包涵体形式进行表达且需要重新变性溶解复性才可得到活性蛋白，从而显著提高了E7蛋白的制备效率，可高效获得具有高纯度、天然活性的HPV16型E7蛋白。该方法操作简单，成本低廉，采用该方法制备得到的HPV16型E7活性蛋白可作为抗原，用于制备抗HPV的治疗性疫苗，具有极高的生产应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人乳头瘤病毒HPV16型E7活性蛋白的制备方法及应用。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)是一种球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出100多种，其中黏膜高危型HPV-16、18、30、31、33、35、53、39与宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等多种癌症相关。

目前已经有HPV预防性二价疫苗(HPV16，18)、四价疫苗(HPV6，11，16，18)和九价疫苗(HPV6，11，16，18，31，33，45，52，58)，可以预防多种病毒类型感染，但其价格昂贵，并且作为预防性疫苗，对于已经感染HPV的人则无法发挥作用。因此寻求高性价比的疫苗，解决疫苗的亚型限制，并制备相应的治疗性疫苗仍然是宫颈癌防控研究的热点。

HPV感染尤其是高危型的HPV感染是大多数宫颈癌发生的主要原因，而HPV 16型，18型在高危HPV中最常见。HPV 16型感染多发于宫颈鳞状细胞癌，占宫颈癌的70％以上。HPV16型的E7基因是致癌的关键基因之一，E7基因编码的E7蛋白可以抑制宿主凋亡，使细胞生长失控，促进肿瘤血管的新生。E7蛋白作为肿瘤特异性排斥抗原，与MHC分子亲和力高、抗原性强，是开发HPV治疗性疫苗的首选靶抗原。因此高效制备E7活性蛋白具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种人乳头瘤病毒HPV16型E7活性蛋白的制备方法及应用，通过对HPV16型E7蛋白的编码基因进行密码子优化，并利用大肠杆菌发酵系统获得目的蛋白，提高了目的蛋白的溶解性，使其表现为可溶性蛋白，从而显著提高了HPV16型E7蛋白的制备效率，获得了具有高纯度、天然活性的HPV16型E7蛋白，该方法操作简单，成本低廉，采用该方法制备得到的HPV16型E7活性蛋白可作为抗原，用于制备抗HPV的治疗性疫苗，因此具有极高的生产应用价值。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

本发明提供了一种密码子优化的HPV16型E7蛋白编码基因，所述基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述编码基因编码的HPV16型E7蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO.2所示。

本发明还提供一种扩增上述密码子优化的HPV16型E7蛋白编码基因的引物，所述引物的序列如序列表SEQ ID NO.4-5所示。

本发明还提供一种表达载体，所述表达载体包含上述密码子优化的HPV16型E7蛋白编码基因。

进一步地，所述表达载体选自PET载体或毕赤酵母表达载体。

进一步地，所述表达载体为pET-28a载体。

本发明还提供了一种细胞，所述细胞中包含上述表达载体。

进一步地，所述细胞选自大肠杆菌、酵母或真核细胞。

进一步地，所述细胞为大肠杆菌细胞。