[发明专利]高效聚磷菌的获取方法

说明书

本发明公开了一种高效聚磷菌的获取方法，包括步骤：取得运行状态良好的生物膜反应器内的活性污泥，将所述活性污泥中的菌液接种到分离培养基，分离纯化出单菌落，然后筛选出高效聚磷菌；所述分离培养基的原料包括营养液，所述营养液是由所述生物膜反应器内采集的反应液经滤膜过滤除菌而成。解决分离筛选过程中部分高效聚磷菌因分离培养基营养缺乏引起的分离筛选较难的问题。本技术方案的分离培养基中包括营养液，能够模拟生物膜反应器内的微生物代谢活性成分，最大限度保证聚磷菌的生长环境和反应器中一致，为部分需要其它微生物代谢活性成分才能生长的聚磷菌提供充足的营养，保证其能够被分离筛选。

技术领域

本发明涉及微生物驯化富集技术领域，特别涉及一种高效聚磷菌的获取方法。

背景技术

水体中的磷含量超标会引起水体富营养化从而危害水环境和人类健康，基于生物膜中聚磷菌好氧吸磷/厌氧释磷的原理进行的生物膜法除磷是生物除磷法的一种，它以高效低耗的除磷优势被广泛研究和应用。其中高效聚磷菌的种类和生长与生物膜法除磷性能密切相关。常见的高效聚磷菌分离筛选技术有：1)反应器驯化，分离培养基分离和纯化，筛选鉴定；2)分离培养基直接分离纯化，筛选鉴定；3)反应器驯化，摇瓶驯化，LB培养基分离纯化，筛选鉴定。但是从实际操作中能够发现污水处理厂优势聚磷菌的种类与已分离筛选的高效聚磷菌差异较大，部分聚磷菌无法进行分离筛选，部分分离后获得的聚磷菌扩大培养困难，使得能获得的高效聚磷菌种类有限。

发明内容

本发明目的在于提供一种高效聚磷菌的获取方法，以解决现有技术中所存在的一个或多个技术问题，提供至少一种有益的选择或创造条件。

一种高效聚磷菌的获取方法，包括步骤：

制备活性污泥：从运行状态良好的生物膜反应器中上、中、下三部分生物膜各分别取得活性污泥，混合均匀后离心，弃上清，加入0.9％的无菌氯化钠溶液，混合均匀后将生物膜打散，得到菌液；

接种和分离纯化：将所述菌液接种到分离培养基，分离纯化出单菌落，所述分离培养基的原料包括营养液，所述营养液是由所述生物膜反应器内采集的反应液经滤膜过滤除菌而成；

筛选鉴定：将分离纯化的单菌落接种到检测培养基中，每升检测培养基包含5g/L的NaAC，0.4g/L的NH₄Cl，0.2g/L的牛肉膏，0.4g/L的胰蛋白胨，0.1g/L的KH₂PO₄，1～2mL/L的微量元素液，其余为水，调节pH为7.0～7.2。

上述高效聚磷菌的获取方法是在现有的筛选技术上进行改进，旨在解决分离筛选过程中部分高效聚磷菌因分离培养基营养缺乏引起的分离筛选较难的问题。生物膜是复杂的微生物群体，有些高效聚磷菌的生长可能需要其它微生物的协同作用，其它微生物代谢的分泌物可能是某些高效聚磷菌生长的关键营养物质。目前大部分高效聚磷菌的分离筛选方法中，驯化培养基、分离培养基常见的是使用和生物膜反应器配水组分相似的配方或LB培养基进行聚磷菌的分离筛选和培养，缺少生物膜反应器中微生物代谢的活性成分，导致部分高效聚磷菌无法被分离筛选。本技术方案的分离培养基中包括由所述生物膜反应器内采集的反应液经滤膜过滤除菌而成的营养液，能够模拟生物膜反应器内的微生物代谢活性成分，最大限度保证聚磷菌的生长环境和反应器中一致，为部分需要其它微生物代谢活性成分才能生长的聚磷菌提供充足的营养，保证其能够被分离筛选。

进一步，所述反应液的采集时机为所述生物膜反应器的好氧末和/或厌氧末。所述“好氧末”是指好氧反应阶段刚刚结束的时间节点，所述“厌氧末”是指厌氧反应阶段刚刚结束的时间节点。反应液可以是单独采自好氧末或厌氧末，也可是将好氧末和厌氧末采得的液体混合而成。不同的反应液组成会提供不同的营养组分，对后续分离培养基所培养出的高效聚磷菌的种类有所影响，但由于不同组合情况的反应液会仍然会与生物膜反应器某个特定时间内的反应环境相吻合，因此分离出的高效聚磷菌仍然能够良好适应该生物膜反应器的工作环境。