[发明专利]在线固相萃取、液相色谱-串联质谱法测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法

说明书

本发明涉及医药技术领域，提供了在线固相萃取、液相色谱‑串联质谱法测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，包括如下步骤：0～1min，固相萃取柱的进样端与萃取泵和自动进样器连通，出样端通过切换阀与排废口连通，分析泵通过切换阀与液相色谱‑串联质谱连通；新鲜血浆或血浆溶液直接进样在固相萃取柱内进行净化处理；1～3min，调整切换阀，将固相萃取柱的两端分别与液相色谱分析柱以及分析泵连通，分析泵将分析物从固相萃取柱转移至液相色谱分析柱内进行分析；3～5min，调整切换阀至0～1min时的连接状态，萃取泵冲洗固相萃取柱并将流动相平衡至初始状态，分析泵配合液相色谱‑串联质谱继续完成分析物的分离。

技术领域

本发明属于生物医药检测技术领域，具体将在线固相萃取与液相色谱-串联质谱法在线连通，实现在线测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂的浓度。

背景技术

肺癌是世界上最常见的癌症，也是癌症相关死亡的主要原因，每年死亡人数超过170万[1]。大约80-85％的肺癌病理上被归为非小细胞肺癌(Non-small-cell lungcancer,NSCLC)[2]。近三十年来，NSCLC的治疗已经由最初的化疗已经转向基于分子靶点的个体化分子靶向治疗，尤其是以EGFR为靶点的药物的发现，在NSCLC个体化治疗的发展中具有里程碑式的意义[3,4]。吉非替尼、奥希替尼、埃克替尼均为EGFR酪氨酸激酶抑制剂，对EGFR突变阳性的NSCLC患者的无进展生存期和总生存期均有明显改善，被批准用于非小细胞肺癌EGFR突变的一线治疗[5]。有研究表明，在固定剂量下，由于酪氨酸激酶抑制剂都经口服给药，且大多经肝药酶代谢，易与食物，伍用药物发生相互作用，个体间药代动力学表现出较大的差异[6]。此外，由于该类药物为长期服用的药物，这种差异可能会造成疗效不足或者引起不良反应[7-9]，为保证药物使用的合理性，有必要对这类药物进行血药浓度的监测。

高效液相色谱法或高效液相色谱串联质谱法是目前酪氨酸激酶抑制剂的常用检测技术。由于血浆样品中含有大量的蛋白和磷脂等大分子杂质，在样品分析前需要对其进行复杂的前处理，文献报导多采用蛋白沉淀，液液萃取或离线固相萃取等方式[10,11]。这些传统的前处理方法由于耗时，步骤繁琐，且重现性差等原因，使其不能满足医院大样本量快速检测的要求。因此，探究一种前处理简单、自动化程度高的分析方法实属必要。

发明内容

本发明为解决上述技术问题进行，将在线固相萃取与液相色谱-串联质谱联用，采用在线固相萃取对血浆样品进行净化处理，并基于阀切换将其与液相色谱-串联质谱连通，实现快速测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂的浓度。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供的在线固相萃取、液相色谱-串联质谱法测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，包括如下步骤：

0～1min，固相萃取柱的进样端通过切换阀与萃取泵以及自动进样器连通，出样端通过切换阀与排废口连通，分析泵通过切换阀与液相色谱-串联质谱连通；新鲜血浆或血浆溶液经所述萃取泵以及自动进样器进入所述固相萃取柱内进行净化处理；

1～3min，调整切换阀，将所述固相萃取柱的两端分别与液相色谱分析柱以及分析泵连通，分析泵将分析物从固相萃取柱转移至液相色谱分析柱内进行分析；

3～5min，调整切换阀至0～1min时的连接状态，萃取泵冲洗固相萃取柱并将流动相平衡至初始状态，分析泵配合液相色谱-串联质谱继续完成分析物的分离，

其中，固相萃取柱和液相色谱分析柱的流动相相同，流动相A为乙腈，流动相B为含有0.1％甲酸、浓度为5mmol/L的醋酸铵溶液；萃取及分析过程中，不同时间段，流动相A与流动相B件间的体积比不同。