[发明专利]一种裸眼可视化检测探针检测黄曲霉素的方法

说明书

本发明公开了一种裸眼可视化检测探针检测黄曲霉素的方法，包括以下步骤：配置溶液1：溶液1含有10‑40mM HEPES缓冲溶液、0.5‑1μM的探针1、5‑200mM的NaCl、5‑200mM的KCl、0.05％‑0.5％的Triton‑X‑100、0.5‑5μM的Hemin；配置溶液2：溶液2含有不同浓度的0‑100μM的AF；配置溶液3：溶液3含有10‑40mM的HEPES缓冲溶液、0.5‑5mM的Hsubgt;2/subgt;Osubgt;2/subgt;、0.5‑4mM的ABTS；检测：将13μL溶液2加入到27μL的溶液1后，再加入10μL溶液3进行反应，并利用酶标仪记录1‑30min时溶液在418nm处的吸收值，用手机拍照记录每一分钟溶液颜色变化情况。本发明操作简单，易携带，低成本，不需要专业的技术人员，检测时间快，5分钟即可裸眼看到颜色变化，稳定性好，高灵敏性，可作为用于现场分析食品药品样品中AF的有用工具。

技术领域

本发明涉及食品、中药材安全检测技术领域，具体是一种裸眼可视化检测探针检测黄曲霉素的方法。

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxins,AF)是一类剧毒物质，主要由黄曲霉(Aspergillusflavus)和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)代谢产生的化学结构类似的二呋喃香豆素衍生化合物。在食品、中药材等加工、贮藏、运输的过程中易霉变而发生黄曲霉毒素污染，而黄曲霉毒素耐高温、不易分解，去除困难，还具有极强的致癌性、致畸及致突变作用，被国际癌症研究机构列为Ⅰ类致癌物质。此外，黄曲霉毒素具有肝毒性和肾毒性，可引起人或动物的急、慢性中毒。目前，主要包括六种黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2、M1及M2)，其中黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性最强，其毒性是氰化钾的10倍，是砒霜的68倍，是三聚氰胺的416倍。目前可用于AF检测的主要有色谱法(高效液相色谱法(HPLC)、液质联用(HPLC/MS)、薄层色谱法(TLC))和酶联免疫吸附法(ELISA)。其中，TLC灵敏度低、检测限高、稳定性差，难以满足日益严格的检测要求；HPLC及HPLC/MS的仪器成本高、样品前处理和数据分析复杂、需要专业的技术人员等；ELISA则主要受限于抗体本身存在的保存困难、易失活、成本高等问题的限制。因此，现有的技术难以用于AF的即时筛查(POCT)，亟待开发一种简单、快速、灵敏度高的方法用于AF的检测。

DNA模拟酶(DNAzyme)在H₂O₂的作用下可将无色的2,2’-联氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)催化氧化成绿色的ABTS^·+。本发明研究者发现AF可抑制DNAzyme的催化活性。在此发现的基础上，本发明开发了一种基于DNAzyme的探针用于AF的裸眼可视化检测，当体系中存在AF时，探针的催化反应被抑制，溶液为无色或浅绿色；当不存在AF时，探针可将ABTS催化成ABTS^·+，溶液呈深绿色。为进一步提高裸眼可视的直观性，本发明通过计算机分离实时拍摄的照片的RGB通道，将绿色通道通过计算映射成新的RGB图片(G→RGB转化)。该方法具有免标记、快速、灵敏、可裸眼实时监测。本发明有望实现AF的现场快速筛查，为保证食物及药物等制品的安全性奠定一定的实验基础，并拓展AF检测探针设计的思路。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是克服以上的技术缺陷，提供一种裸眼可视化检测探针检测黄曲霉素的方法，该检测具有简单，便携，可裸眼实时监测，不需要专业技术人员操作。

为了解决上述问题，本发明的技术方案为：一种裸眼可视化检测探针检测黄曲霉素的方法，包括以下步骤：

(1)配置溶液1：溶液1含有10-40mM HEPES缓冲溶液、0.5-1μM的探针1、5-200mM的NaCl、5-200mM的KCl、0.05％-0.5％的Triton-X-100、0.5-5μM的Hemin；

(2)配置溶液2：溶液2含有不同浓度的0-100μM的AF；