[发明专利]一种猪肺泡巨噬细胞的制备方法

权利要求书

1.一种猪肺泡巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

获得含有肺和气管的猪肺脏样品；

获得细胞洗涤液引流装置，所述细胞洗涤液引流装置包括：灌胃针头、输液器和用于装细胞洗涤液的容器；所述输液器包括输液管、设置在所述输液管上的开关、分别设置在所述输液管两端的进液接头和出液接头；所述进液接头与所述用于装细胞洗涤液的容器相连通，所述出液接头与所述灌胃针头相连接；所述输液器上设有流量调节件以控制细胞洗涤液注入猪肺脏组织的速度与注入量；所述灌胃针头为16～20号弯头灌胃针头；

将所述细胞洗涤液引流装置中的所述灌胃针头伸入所述猪肺脏样品中的肺主气管内，打开所述开关以注入所述细胞洗涤液，待所述猪肺脏样品中整个肺脏充盈时，关上所述开关，取出所述灌胃针头并采用止血钳夹紧肺主气管，获得充盈肺脏；所述注入细胞洗涤液过程中，开始流速为10～30滴/秒，直至肺脏充盈度为80～90%时，调节流速为1～2滴/秒，至肺脏完全充盈停止注入所述细胞洗涤液；

将所述充盈肺脏装进自封袋并封口，置于振动器上振动2.5～3.5分钟；将所述自封袋翻面，再次振动2.5～3.5分钟；松开所述止血钳，通过所述肺主气管倒出获得灌洗液；所述振动器频率均为2500～3000rpm；

将所述灌洗液离心和固液分离，获得猪肺泡巨噬细胞沉淀；

将所述猪肺泡巨噬细胞沉淀进行细胞培养，获得猪肺泡巨噬细胞。

2.根据权利要求1所述的一种猪肺泡巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述细胞洗涤液为含100IU/ml肝素、100U/ml青霉素、0.1mg/ml链霉素的无菌磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种猪肺泡巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述细胞洗涤液的注入量为1000～1500ml。

4.根据权利要求1所述的一种猪肺泡巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述离心的

转速为1000～1500 rpm，所述离心的时间为5～10分钟。

5.根据权利要求1所述的一种猪肺泡巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述细胞培养中，培养基的配方为89%DMEM+10%FBS+1%双抗。