[发明专利]减少重组人血白蛋白发酵过程中色素的方法

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及减少重组人血白蛋白发酵过程中色素的方法。本发明的减少重组人血白蛋白发酵过程中色素的方法，包括向发酵液中加入辛酸钠和/或半胱氨酸的步骤。本发明在重组人血白蛋白的发酵过程中加入半胱氨酸和辛酸钠，可以有效降低发酵液中色素水平，有利于下游的纯化工艺达到医药级基因重组人血白蛋白的水平，同时，还可以稳定目的蛋白质在发酵液的半衰期，保护白蛋白免受蛋白酶的降解。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及减少重组人血白蛋白发酵过程中色素的方法。

背景技术

人血白蛋白HSA是一种单链蛋白质，由585个氨基酸残基组成，N端是天门冬氨酸，C端是亮氨酸。mRNA由2078个核苷酸组成。成熟的HSA分子的氨基酸序列中共有17对二硫键，一个半胱氨酸位点，一个色氨酸位点，空间结构类似椭圆形。

人血白蛋白HSA(Human Serum Albumin)作为人体血浆中最丰富的蛋白质，起着维持血浆渗透压、运输营养和其他重要作用。临床上用于休克、烧伤、创伤、低蛋白血症或急性血容量减少症的治疗，其使用剂量一般高达10g，是其他生物因子类产品的几万至百万倍，占国际市场血液制剂销售额的首位。

现有技术利用微生物体重组表达人血白蛋白的，但是该方法获得的重组白蛋白中外源性物质较多，而且由于人血白蛋白注射剂量较大，微量的抗原性物质都可能引起过敏反应，甚至危害患者的生命安全，因此对基因工程重组人血白蛋白的纯度要求更高，纯化技术难度更大。

甲醇酵母发酵过程中往往产生大量的色素，对下游纯化非常不利。目前，限制白蛋白达到医药级水平的主要因素有两个：一个是色素的去除；另一个是HCP的去除。现有重组人血白蛋白生产工艺中，均为发酵完成后，在纯化工艺增加去除色素步骤，工艺繁琐、且纯化效果不理想。

发明内容

本发明的目的在于提供一种减少重组人血白蛋白发酵过程中色素的方法。

根据本发明具体实施方式的减少重组人血白蛋白发酵过程中色素的方法，所述方法包括向发酵液中加入辛酸钠和/或半胱氨酸的步骤。

基因重组人血白蛋白发酵过程中，加入辛酸钠、半胱氨酸或者辛酸钠和半胱氨酸的组合物均可起到降低发酵液色素浓度的效果。

其中，辛酸钠的用量为1～16μM，半胱氨酸的用量为1～16μM；具体的，加入辛酸钠的量为1μM、2μM、3μM、4μM、5μM、6μM、7μM、8μM、9μM、10μM、11μM、12μM、13μM、14μM、15μM、16μM，根据实际生产的需要，辛酸钠的量可以调整为非整数用量，如1.5μM、2.5μM、3.5μM、4.5μM、5.5μM、6.5μM、7.5μM、8.5μM、9.5μM、10.5μM、11.5μM、12.5μM、13.5μM、14.5μM、15.5μM；

同样的，加入半胱氨酸的量为1μM、2μM、3μM、4μM、5μM、6μM、7μM、8μM、9μM、10μM、11μM、12μM、13μM、14μM、15μM、16μM，根据实际生产的需要，半胱氨酸的量可以调整为非整数用量，如1.5μM、2.5μM、3.5μM、4.5μM、5.5μM、6.5μM、7.5μM、8.5μM、9.5μM、10.5μM、11.5μM、12.5μM、13.5μM、14.5μM、15.5μM。

优选的，辛酸钠的用量为1～3μM，半胱氨酸的用量为1～3μM；当加入辛酸钠2μM、半胱氨酸2μM时，发酵液中色素的去除效果最为显著。

发明人前期研究发现，除了辛酸钠和半胱氨酸外，谷胱甘肽、DTT、巯基乙醇、乙酰色氨酸等试剂，也具有发酵过程中降低色素浓度的作用，上述试剂的用量为1～16μM。

加入辛酸钠和/或半胱氨酸的时机为，甲醇诱导开始同时、甲醇诱导开始前，或者甲醇诱导过程中，其中，以甲醇诱导开始的同时加入酸钠和/或半胱氨酸，色素降低的效果最为明显。