[发明专利]一种布鲁氏菌A19株特异性多肽、ELISA检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种布鲁氏菌A19株特异性多肽、ELISA检测试剂盒及应用，属于生物检测技术领域。具体公开一种布鲁氏菌A19株特异性多肽作为抗原在制备布鲁氏菌A19抗体检测试剂盒中的应用，所述特异性多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明通过比对布鲁氏菌A19株和2308株的核酸和蛋白序列差异，发现布鲁氏菌A19株特异性多肽，并且以该特异性多肽为抗原构建的ELISA检测方法可以特异性地检测A19疫苗的免疫抗体，结合其它抗体试剂盒，可在免疫动物群体中鉴别出布鲁氏菌野毒感染动物，为布病净化提供了有力的支撑。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种布鲁氏菌A19株特异性多肽、ELISA检测试剂盒及应用。

背景技术

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜兽共患传染病，动物布病防控的主要策略是检疫与净化。目前，使用的疫苗株主要是牛种布鲁氏菌A19疫苗株和猪种布鲁氏菌S2疫苗株，以前还曾使用过羊种M5-90疫苗株，由于毒力问题现在暂时不再使用。A19疫苗株的毒力较弱，免疫效果好，目前在牛的免疫中广泛使用，是目前应用最广的疫苗。但其会干扰常规试剂盒的抗体诊断，不能使用现有的方法对自然感染和A19疫苗免疫动物进行抗体的鉴别，这样在免疫养殖场就不能采用抗体检测的方法进行野毒感染动物的鉴定和淘汰，使得防控布病最有效的免疫和检测相结合的方法不能有效进行。鉴于此，亟需一种特异性检测A19疫苗的免疫抗体的方法以解决目前存在的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种布鲁氏菌A19株特异性多肽、ELISA检测试剂盒及应用，以解决上述现有技术存在的问题，以布鲁氏菌A19株特异性多肽为抗原构建的ELISA检测方法可以特异性地检测A19疫苗的免疫抗体，即可评价A19疫苗的免疫效果，又可结合其它商用布鲁氏菌抗体试剂盒在免疫动物群体中鉴别出布鲁氏菌野毒感染动物，为布病净化提供了有力的支撑。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种布鲁氏菌A19株特异性多肽作为抗原在制备布鲁氏菌A19抗体检测试剂盒中的应用，所述特异性多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供一种ELISA检测试剂盒，包括中所述的特异性多肽。

优选的是，还包括：包被中所述的特异性多肽的酶标板、酶标抗体、封闭液、洗涤液、显色液、阴性对照和阳性对照。

优选的是，所述酶标抗体为HRP标记的兔抗牛IgG抗体。

本发明还提供一种布鲁氏菌A19株特异性多肽作为抗原构建的布鲁氏菌A19抗体的ELISA检测方法，包括以下步骤：

(1)以权利要求1中所述的特异性多肽包被酶标板，包被后用BSA封闭；

(2)待阴性血清和阳性血清稀释后与包被的特异性多肽进行孵育；

(3)洗涤后，加入HRP标记的兔抗牛二抗进行孵育；

(4)洗涤后，加入显色液显色反应，然后加入10％硫酸溶液终止反应，在450nm下测定OD值，以判定布鲁氏菌A19抗体的水平。

优选的是，所述特异性多肽浓度为8-15μg/ml。

优选的是，步骤(1)中，包被条件为：4℃包被过夜；封闭条件为：0.5％BSA封闭30-60min。

优选的是，步骤(2)和步骤(3)中孵育时间均为20-40min。

优选的是，步骤(4)中，用TMB溶液避光显色10-20min。

本发明公开了以下技术效果：

(1)可使用本发明在免疫猪群中批量检测野毒感染动物并将其淘汰，便于将免疫和淘汰相结合，更好地进行布病的防控。