[发明专利]一种CHO细胞宿主蛋白残留量检测方法

说明书

本发明提供一种CHO细胞宿主蛋白残留量检测方法，所述方法包括配制含有表面活性剂的蛋白样品溶液，然后通过ELISA对蛋白样品溶液进行HCP检测，本发明提供了一种专属性强、准确度高、重复性好的CHO细胞宿主蛋白残留量检测方法，对蛋白的质量控制具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物蛋白的质量控制领域，具体涉及一种CHO细胞宿主蛋白残留量检测样品处理及检测方法。

背景技术

许多抗体、疫苗或蛋白类药物的制备主要是通过生物体系合成，其中CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)由于表达的蛋白最接近于天然蛋白分子、产物胞外分泌但很少分泌自身内源蛋白，对目标蛋白分离纯化工作十分有利，是目前被广泛使用的工程细胞具有表达遗传背景清楚、表达系统完善稳定、蛋白表达水平较高等优势。尽管采用多种方式进行纯化，但是CHO细胞仍然会有少量蛋白残留在生物制品的半成品和成品中，例如CHO细胞中残留的宿主蛋白(HCP)作为人类自身系统的外源蛋白，可能会在不同程度上引发机体的免疫应答，最终导致过敏反应或其他不良反应。因此需要建立合适的检测HCP的方法来监控最终生物制品或半成品的质量。

ELISA是目前应用最广泛的HCP检测方法。该方法相对简单，精良度好，方便设定控制范围和建立技术规范。目前已经有多种商品化的ELISA试剂盒可以用于HCP的检测，还可以通过自制多克隆抗体进行检测。虽然目前的检测方法给HCP的检测原理和方法提供了一种通行的指引，但是很少有人关注到检测样品处理对检测结果的影响，申请人发现如果检测样品处理不当，可能影响HCP的检测效果，如回收率、准确性、精密度等。

发明内容

本发明为了解决现有技术中HCP检测的缺陷，提供了一种回收率高、准确度和精密度好的CHO细胞宿主蛋白(HCP)残留量的ELISA检测方法，包括：

1)配制含有表面活性剂的待测蛋白样品溶液；

2)通过ELISA对步骤1)所述的样品溶液进行HCP残留量检测。

其中，所述表面活性剂选自吐温20或吐温80。在一些优选实施例中，所述表面活性剂的浓度为0.75-1.2wt％。在一些优选的实施例中，所述表面活性剂的浓度为0.83-1wt％。在一个具体的实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.83wt％。

其中所述蛋白为具有生物学会活性及临床应用价值的目标蛋白，所述蛋白可以为本领域已知的抗体、蛋白或多肽产品，也可以是本领域技术人员根据已知的生物学方法进行构建以及通过CHO细胞生产获得的蛋白。在一个具体的实施例中，本发明所述的蛋白为康柏西普，具有如SEQ ID NO:1所述的氨基酸序列。

在一些优选实施例中，本发明所述的蛋白样品溶液的浓度为0.92mg/ml-1.38mg/ml，优选1mg/ml。

在一个具体的实施方案中，本发明所述的检测方法，步骤1)中所述的样品溶液采用缓冲溶液进行配制，其中所述缓冲液型号为：CYGNUS I028-100。

在一个具体的实施方案中，本发明所述的检测方法，步骤2)中，将步骤1)所述的样品溶液加入碱性磷酸酶标记的HCP抗体中，形成抗原-抗体复合物，孵育后然后加入显色液进行显色，405nm(测定波长)/492nm(参比波长)读数，通过HCP标准曲线计算待测样品溶液中的HCP含量。

在一个具体的实施方案中，显色液为对-硝基苯磷酸酯。

在一个具体的实施方案中，本发明所述的检测方法包括：

1)利用CYGNUS I028-100缓冲溶液配制含0.83wt％吐温20或吐温80的蛋白样品溶液，其中蛋白浓度为1mg/ml；

2)将步骤1)所述的样品溶液加入碱性磷酸酶标记的HCP抗体中，形成抗原-抗体复合物，孵育后然后加入显色液进行显色，405nm(测定波长)/492nm(参比波长)读数，通过HCP标准曲线计算待测样品溶液中的HCP含量。