[发明专利]一种重组溶瘤痘苗病毒、制备方法及其用途

说明书

本发明公开了一种重组溶瘤痘苗病毒、制备方法及其用途，所述重组溶瘤痘苗病毒可操作地插入能够表达CD47纳米抗体的外源基因，所述外源基因插入痘苗病毒TK基因中；所述外源基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示；所述外源基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。重组溶瘤痘苗病毒在制备用于预防或治疗肿瘤或/和癌症的药物中的用途。所述肿瘤或/和癌症包括乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、结肠腺癌。本申请创造性地将CD47纳米抗体基因插入溶瘤痘苗病毒，使得溶瘤痘苗病毒在肿瘤细胞中复制并裂解细胞，杀死肿瘤细胞的同时，表达CD47纳米抗体，促进巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，从而提高了治疗效果。

技术领域

本发明涉及溶瘤痘苗病毒技术领域，具体为一种重组溶瘤痘苗病毒、制备方法及其用途。

背景技术

CD47也称整合素相关蛋白(integrin-associated protein，IAP)，是一种细胞膜表面广泛表达的五跨膜受体，属于免疫球蛋白超家族。CD47与巨噬细胞表面的SIRPα(signal regulatory protein alpha)结合，激活酪氨酸磷酸化酶，抑制肌球蛋白在巨噬细胞突触膜下装配位点的聚集，发出“别吃我”的信号，CD47在正常细胞的上的表达水平较低，而在多种肿瘤，包括淋巴瘤和白血病、肉瘤以及几乎所有实体瘤，高水平表达CD47促使肿瘤细胞逃避巨噬细胞的吞噬作用。因此，可以通过CD47抗体阻断肿瘤细胞上的CD47与吞噬细胞上的SIRPα的结合，促进吞噬作用，达到清除肿瘤的目的。

溶瘤免疫治疗(oncolytic virotherapy)是当前治疗癌症的有效手段之一，溶瘤病毒成为肿瘤免疫治疗领域里的一大热点。溶瘤病毒的抗肿瘤作用体现在以下几点：溶瘤病毒能直接感染并裂解肿瘤细胞，即溶瘤(oncolysis)，导致肿瘤抗原和危险信号的释放，激活抗病毒反应，即固有免疫，进而激活适应性免疫，导致肿瘤的清除；插入外源基因的溶瘤病毒通过在肿瘤细胞内复制，来表达各种外源基因，这也是现有较为常规的治疗癌症的方法。

基于上述情况，我们公开了一种重组溶瘤痘苗病毒、制备方法及其用途，并针对性陈述其应用，以公开一种用于治疗癌症或/和肿瘤的重组溶瘤痘苗病毒，解决上述技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组溶瘤痘苗病毒、制备方法及其用途，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种重组溶瘤痘苗病毒，所述重组溶瘤痘苗病毒可操作地插入能够表达CD47纳米抗体的外源基因。

较优化的方案，所述外源基因插入痘苗病毒TK基因中。

较优化的方案，所述外源基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

较优化的方案，所述外源基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

较优化的方案，所述外源基因通过IRES序列连接。所述IRES序列如SEQ ID NO.4所示。

较优化的方案，一种重组溶瘤痘苗病毒的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)基因合成方法合成外源基因序列，所述外源基因能够表达CD47纳米抗体；

(2)将外源基因序列装载于pCB穿梭质粒上，得到pCB-nanoCD47质粒；

(3)将pCB-nanoCD47质粒、野生型痘苗病毒转入HEK293细胞中，在HEK293细胞中，pCB-nanoCD47质粒与野生型痘苗病毒发生同源重组，外源基因序列插入野生型痘苗病毒TK基因中，得到重组溶瘤痘苗病毒；

(4)通过黄嘌呤、次黄嘌呤和霉酚酸依次进行痘苗病毒筛选，得到纯化后的重组溶瘤痘苗病毒。