[发明专利]细胞重复利用生产普鲁兰多糖的方法及应用

权利要求书

1.细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）将预先制得的出芽短梗霉种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；

2）发酵培养一周后，使用盐酸或氢氧化钠调节发酵液中的pH值；

3）发酵液中的pH稳定后，往发酵液中滴加絮凝剂和助凝剂，并进行振荡混匀；

4）将振荡混匀后的发酵液静置待菌液分层后，倾倒使菌液分离，得到含有普鲁兰多糖的发酵液清液和絮凝沉淀的出芽短梗霉菌体，收集含有普鲁兰多糖的发酵液清液提取普鲁兰多糖，将絮凝得到的出芽短梗霉菌体用新鲜培养基重新悬浮并继续发酵，继续制得普鲁兰多糖。

2.如权利要求1所述的细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于步骤1）中出芽短梗霉种子液的接种量为6%，种子液培养的时间为2-3天，培养条件为：培养温度28℃，摇床转速180r/min。

3.如权利要求1所述的细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于步骤1）中种子液制备用培养基包括如下重量百分含量的组分：葡萄糖5%，蛋白胨0.1%，酵母提取物0.1%，KH₂PO₄ 0.5%，MgSO₄•7H₂O 0.04%，NaCl 0.1%，水余量。

4.如权利要求1所述的细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于步骤1）中发酵培养基包括如下重量百分含量的组分：葡萄糖12%，NH₄NO₃ 0.1%，KH₂PO₄ 0.01%，KCl0.05%，MgSO₄•7H₂O 0.02%，水余量，发酵培养条件为：培养温度28℃，摇床转速180r/min。

5.如权利要求1所述的细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于步骤2）中盐酸或氢氧化钠的浓度为2mol/L，发酵液pH值调节至5.0-5.5。

6.如权利要求1所述的细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于步骤3）中絮凝剂为1%醋酸溶液配制并高压灭菌的10g/L壳聚糖溶液，滴加量为0.03-0.04mL/mL；助凝剂为用超纯水配制并高压灭菌后的10g/L海藻酸钠溶液，滴加量为0.02-0.04mL/mL。

7.如权利要求1所述的细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于步骤3）中发酵液振荡混匀条件为28℃、180 r/min，时间为20-30min。

8.如权利要求1所述的细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于所述发酵液絮凝处理后细胞絮凝率的计算公式为：；普鲁兰多糖保留率的计算公式为：保留率。

9.权利要求1-8所述的细胞重复利用发酵生产普鲁兰多糖的方法在普鲁兰多糖生产中的应有。