[发明专利]分泌抗非洲猪瘟病毒E165R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗体、抗原表位肽及应用

说明书

本发明公开了一株分泌抗非洲猪瘟病毒E165R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分类命名为：ASFV‑E165R‑8F9，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:C2021181，保藏日期：2021年7月15日。本发明还公开了该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体、该单克隆抗体在制备检测非洲猪瘟病毒的试剂、试剂盒、生物芯片中的应用、在制备预防或治疗非洲猪瘟病毒的药物中的应用。本发明还提供了该单克隆抗体识别的抗原表位在制备预防或治疗非洲猪瘟病毒的药物中的应用。本发明的单克隆抗体，能够显著抑制E165R的酶活性，具备开发为ASFV治疗性抗体药物的应用潜力。

技术领域

本发明涉及分子病毒学和免疫技术领域，尤其涉及一种分泌抗非洲猪瘟病毒E165R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗体、抗原表位肽及应用。

背景技术

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)属于非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员，能够感染家猪、野猪，引起急性、出血性的烈性传染病病原，感染致死率高达100％，是我国动物疫病防控中重点监控的Ⅰ类动物疫病，目前尚无安全有效的疫苗用于ASFV的防控。

ASFV是双链DNA病毒，基因组长170-193Kb，病毒颗粒直径为260-300nm，编码超过150种蛋白。ASFV结构复杂，具有外膜、外衣壳、内膜、内衣壳、核壳五层囊膜结构。复制过程中会编码多种核酸复制相关酶类，用于保证复制的保真性。

E165R蛋白是ASFV编码的一种dUTPase酶(脱氧尿苷焦磷酸酶)，用于控制DNA复制过程中dUT/dTT的比例，降低DNA复制过程中的错误碱基的引入。前期的研究表明，缺失E165R基因会导致ASFV在细胞上的复制水平下降；晶体结构解析显示E165R是一种三聚体结构，属于Ⅰ型dUTPase酶。E165R蛋白是ASFV药物、疫苗研究的重要靶点之一，制备针对E165R的单克隆抗体药物是ASFV相关药物研发的重要的方向之一。

发明内容

本发明提供了一种分泌抗非洲猪瘟病毒E165R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗体及应用,并鉴定了该抗体识别的表位肽信息，提供了抗原表位肽及应用，解决了现有技术中存在的问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案是：

一种分泌抗非洲猪瘟病毒E165R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分类命名为：ASFV-E165R-8F9，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:C2021181，保藏日期：2021年7月15日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学。

上述抗非洲猪瘟病毒E165R单抗的杂交瘤细胞株的制备方法如下：

利用大肠杆菌表达系统制备具有6个组氨酸(His)标签的重组E165R蛋白，经过亲和层析和分子筛纯化后免疫小鼠，制备杂交瘤单克隆细胞株。

一种抗非洲猪瘟病毒E165R蛋白的单克隆抗体，通过培养上述杂交瘤细胞株获得，命名为ASFV-E165R-8F9。通过蛋白重叠表达和合成重叠的多肽，利用蛋白免疫印迹(Western blotting)和酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测抗体识别的具体表位肽信息为 149-RGEGRFGSTG-158，对抗体进行亚型分类显示该抗体为IgG2A。

进一步地，培养上述杂交瘤单克隆细胞株获得单克隆抗体，经过重组E165R 蛋白的Western blotting和真核瞬时转染后间接免疫荧光(Indirect immunofluorescentassay，IFA)鉴定后，获得能够识别E165R重组蛋白的单克隆抗体，命名为ASFV-E165R-8F9单克隆抗体。