[发明专利]一种基于结合化合物的间充质干细胞分离的方法

说明书

本发明公开了一种基于结合化合物的间充质干细胞分离的方法，其包括：从癌细胞的器官样本制备细胞悬液后将其封装在包覆琼脂糖的培养基中；在培养基中实现细胞传代培养；使所述细胞培养基悬液与Lgr6型和/或Lgr5型结合化合物接触，然后使所述细胞与相应的抗癌化学治疗剂接触至一定时间；量取间充质干细胞上清液，经外泌体分离纯化后，从所述培养基悬液中取出存活细胞，鉴定所述细胞是否与结合化合物结合；将所述间充质干细胞与所述结合化合物分离。本发明还涉及获得的干细胞和它们在用于制备治疗受损或患病组织的药物中的用途。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其是涉及一种基于结合化合物的间充质干细胞分离的方法。

背景技术

目前，癌症已经成为世界各国患者的重要死因，而目前化学治疗仍是最为常见的手段之一。在化学治疗和缓解后来自癌症的大多数死亡起因于一种或多种原始治疗肿瘤的复发。AACR规定间充质干细胞“是肿瘤内的细胞，具有自我更新和产生组成肿瘤的癌细胞的异质谱系的能力。因此间充质干细胞只能够依据它们重演不断生长的肿瘤的产生的能力试验性地定义”。

大多数抗癌小分子化合物都具有高亲油性和低水溶性，导致其生物利用率低，这常被认为是这些抗癌药物开发和临床应用的一个关键障碍。表面受体Lgr5型和Lgr6型在多种组织标记成体干细胞，并且在多种类型的癌症中标记间充质干细胞。目前研究发现间充质干细胞外泌体具有与干细胞相似的治疗效果，具有易于冻存、运输、定量和移植等优势，且由于其能在细胞间传递的众多生物活性分子，被认为具有良好的作为药物递送载体的潜力。然而，尚无间充质干细胞外泌体分离并用于干细胞治疗的有效手段及其应用的方法。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种基于结合化合物的间充质干细胞分离的方法，能够间充质干细胞及外泌体的有效分离并用于干细胞治疗的应用。

本发明所采取的技术方案是：本发明的第一方面，提供基于结合化合物的间充质干细胞分离的方法，其包括：(a)从癌细胞的器官样本制备细胞悬液后将其封装在包覆琼脂糖的培养基中；在培养基中实现细胞传代培养；

(b)使所述细胞培养基悬液与Lgr6型和/或Lgr5型结合化合物接触，然后使所述细胞与相应的抗癌化学治疗剂接触至一定时间；

(c)量取间充质干细胞上清液，经外泌体分离纯化后，从所述培养基悬液中取出存活细胞，鉴定所述细胞是否与结合化合物结合；

(d)将所述间充质干细胞与所述结合化合物分离。

根据本发明的一些实施例，所述干细胞是胃干细胞、肝干细胞或肺干细胞中的一种。

根据本发明的一些实施例，所述间充质干细胞是脂肪间充质干细胞(ADSCs)。

根据本发明的一些实施例，所述步骤a中的培养基由DMEM/F12、缓冲液和少量霉素混合液配制。

根据本发明的一些实施例，所述步骤b中的所述结合化合物为能够结合Lgr5型或Lgr6型的至少两种不同的抗体或抗体衍生物或抗体片段。

根据本发明的一些实施例，所述步骤b中的所述抗癌化学治疗剂为丝裂霉素或紫杉醇。

根据本发明的一些实施例，所述步骤c中，分离纯化步骤具体包括：量取250毫升间充质干细胞的细胞上清液，经离心去除细胞碎片等沉淀；用真空循环水泵在1bar的负压表压下，将离心后的上清液用0.2微米孔径的PES滤膜完全过滤。

根据本发明的一些实施例，所述细胞是对于丝裂霉素有抗性的。

根据本发明的一些实施例，所述癌细胞是哺乳动物细胞。

本发明还提供一种应用分离后的间充质干细胞的方法，间充质干细胞采用上述任一项的方法制备，并且应用于胃癌、肝癌或肺癌中的一种。