[发明专利]一种木寡糖含量的分析方法

说明书

本发明公开了一种测定木寡糖含量的方法，所述方法包括以下步骤：(1)取木寡糖标准品，制定木寡糖浓度的标准曲线；(2)取待测样品加入检测体系中反应；(3)于分光光度计中测定515nm吸光值；(4)将检测结果与标准曲线进行线性拟合，获得木寡糖含量；其中，所述检测体系包括4‑氨基安替比林，3,5‑二氯‑2‑羟基苯磺酸钠盐，辣根过氧化物酶，磷酸盐缓冲液和木寡糖氧化酶。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于木寡糖氧化酶的木寡糖含量测定方法。

背景技术

木寡糖(XOS)是由木聚糖经酶解产生的聚合度为2-10的木糖低聚物，商业上主要是以富含木聚糖的木质纤维素为原料，经过木聚糖酶水解后分离精制而得。

XOS在酸性条件下相对稳定，是一种新型的不易消化的低聚糖(NDO)。在胃肠道中的不可消化性使其对胃酸、哺乳动物水解酶和胃肠道吸收具有天然的抵抗力。口服后会完整地到达结肠，在经过肠道微生物群发酵后，可选择性地刺激肠道微生物群的生长活性，改善肠道微生态，对宿主产生直接的生理作用，包括抗炎、抗氧化、矿物质代谢、脂质代谢和免疫调节等。

而目前常用的木寡糖含量测定方法主要是基于高效阴离子交换色谱或者高效液相色谱，测定步骤较为繁琐，且需要较为昂贵的色谱仪器。

本发明通过筛选和研究木寡糖氧化酶的氧化活性从而建立了一种操作简单且方便快捷以及结果准确等优点的木寡糖含量测定方法。

发明内容

本发明通过在里氏木霉中表达纯化了尚未明确功能的AA7家族基因(NCBI Genesymbol THITE_2106069)，首次鉴定其具有独特的木寡糖氧化活性。

在此基础上，本发明的目的是提供一种基于专一木寡糖氧化活性的木寡糖氧化酶耦联辣根过氧化物酶检测木寡糖含量的方法。具体地，所述方法基于专一木寡糖氧化活性的木寡糖氧化酶耦联辣根过氧化物酶以Trinder试剂作为色源物质产生在515nm波长下具有特征吸收峰的显色产物，仅通过分光光度法测定即可以高效便捷的检测样品中木寡糖含量。

本发明的技术方案为：

一种测定木寡糖含量的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)取木寡糖标准品，制定木寡糖浓度的标准曲线；

(2)取待测样品加入检测体系中反应；

(3)于分光光度计中测定515nm吸光值；

(4)将检测结果与标准曲线进行线性拟合，获得木寡糖含量；

其中，所述检测体系包括4-氨基安替比林，3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠盐，辣根过氧化物酶，磷酸盐缓冲液和木寡糖氧化酶。

具体地，本发明所述检测体系包括10-30微升1mM-3mM 4-氨基安替比林，10-30微升10mM-40mM 3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠盐(DHBS)，5U-10U辣根过氧化物酶，10-30微升1μM-20μM木寡糖氧化酶，用50-100mM磷酸盐缓冲液补到150-250微升。

优选地，本发明所述检测体系包括20微升1mM 4-氨基安替比林，20微升10mM 3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠盐(DHBS)，10U辣根过氧化物酶，20微升10μM木寡糖氧化酶，以及110微升100mM磷酸盐缓冲液。

其中，本发明所述木寡糖氧化酶源自太瑞斯梭孢壳霉，具有如SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。

本发明的另一个目的是提供本发明所述木寡糖氧化酶在测定木寡糖含量中的用途。