[发明专利]一种醛基修饰的琼脂糖介质的制备方法及应用

说明书

本发明提出了一种醛基修饰的琼脂糖介质的制备方法，步骤如下：琼脂糖小球与多聚甲醛修饰剂进行反应，得到醛基修饰的琼脂糖介质；进一步将醛基修饰的琼脂糖介质与乙二胺或三聚氰胺偶联，得到交联的琼脂糖醛基介质。本发明采用多聚甲醛和乙二胺/三聚氰胺偶联在琼脂糖凝胶表面和内部，使琼脂糖之间的高分子链增多，提高了琼脂糖空间结合能力和机械强度，从而避免了蛋白或化学物质会紧贴琼脂糖的表面，空间位阻遮蔽的现象发生。本发明制备方法简单，增加了交联后液体流速，且纯化速度和效果得到很大提升。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种醛基修饰的琼脂糖介质的制备方法及应用。

背景技术

生物医药和检测领域会用到大量的纯化介质，纯化介质中最常使用的生物材料是琼脂糖。琼脂糖链依靠分子内和分子间氢键及其它力的作用使其相互盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶，具有很好的生物相容性及多孔性。

琼脂糖材料作为载体，在其分子表面通过化学反应连接活性分子，使其具有相应的功能。第一种常用的化学修饰有阴离子(磺酸基团)，阳离子(季铵盐)，使其在不同酸碱环境下带有正负电荷，来吸附需要的化学或者有机大分子。还可以连接上芳香烃类，使其变成疏水结合能力的介质。第二种常用修饰为具有偶联能力的分子，可以和羟基(OH-)、氨基(NH₂-)、巯基(SH-)形成稳定的共价键结合，把被偶联的分子，蛋白等物质固定在介质表面。

现有技术中，常采用高碘酸氧化琼脂糖生成醛来结合氨基球生产琼脂糖球的方法，上述方法修饰的醛基团只有一个C链长度，所绑定的蛋白或化学物质会紧贴琼脂糖的表面，会导致空间位阻遮蔽，影响抗体或蛋白的结合，导致纯化效果差。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种纯化效果好、纯化速度快的一种新型醛基修饰的琼脂糖介质的生产方法。

本发明的技术方案是这样实现的：

一方面，本发明提供了一种醛基修饰的琼脂糖介质的制备方法，包括如下步骤：

S1，配制多聚甲醛修饰剂；

S2，将琼脂糖小球加入多聚甲醛修饰剂中进行反应，得到多聚甲醛修饰的琼脂糖介质。

在以上技术方案的基础上，优选的，步骤S1中，多聚甲醛修饰剂以体积百分比为100％计算，包括10-30％甲醇，3-8％多聚甲醛，1-3％pH值为1.5-3.5的酸性缓冲液，余量为水；

在以上技术方案的基础上，优选的，多聚甲醛修饰剂的制备方法为：将多聚甲醛溶于水中，然后依次加入甲醇和酸性缓冲液，搅拌均匀后得到多聚甲醛修饰剂。

在以上技术方案的基础上，优选的，步骤S2中，琼脂糖小球的制备方法为：将粒径为90-120μm，体积浓度为4-8％的琼脂糖小球用体积浓度为1-3％pH值为1.5-3.5的酸性缓冲液冲洗，去除保存液乙醇，得到干净的琼脂糖小球；

在以上技术方案的基础上，优选的，步骤S2的反应过程为：将琼脂糖小球加入多聚甲醛修饰剂中，在60-70℃条件下水浴反应30-40min，然后将反应液温度降至4-10℃；其中琼脂糖小球和多聚甲醛修饰剂的质量比为琼脂糖:多聚甲醛修饰剂＝1:(0.5-3)。

在以上技术方案的基础上，优选的，还包括步骤S3，用10％甲醇水溶液冲洗反应后的琼脂糖小球，得到多聚甲醛修饰的琼脂糖介质。

在以上技术方案的基础上，优选的，还包括步骤S4：将步骤S2制备的多聚甲醛修饰的琼脂糖介质加入多氨基化合物中，经偶联反应后得到交联氨基的琼脂糖介质。

在以上技术方案基础上，优选的，所述多氨基化合物为乙二胺或三聚氰胺。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述偶联反应包括如下步骤：