[发明专利]一种酶法水解富集鱼油中EPA、DHA的方法

说明书

本发明属富集油脂中特定脂肪酸的技术领域，公开了一种酶法水解富集鱼油中EPA、DHA的方法，包括如下步骤：(1)将鱼油、水和脂肪酶混合，20‑70℃进行水解反应，水解产物酸价为60±15mg/g时停止反应；(2)离心步骤(1)水解产物，取上层油相，与水和偏甘油酯脂肪酶混合继续水解反应，水解产物酸价为70±15mg/g时，停止反应；(3)离心步骤(2)水解产物，取上层油相，分子蒸馏后所得重相为富含EPA、DHA的混合甘油酯。水解法直接使用鱼油和水作为原料，环境友好、绿色安全、操作简单，不消耗试剂，成本降低，两步水解后DHA、EPA在鱼油中占比可达45.53％‑60.45％。

技术领域

本发明属于富集油脂中特定脂肪酸的技术领域，具体涉及一种酶法水解富集鱼油中EPA、DHA的方法。

背景技术

二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)均属于ω-3多不饱和脂肪酸系列，后者还是大脑和视网膜组织的细胞膜的主要成分。

但EPA和DHA作为人体不能自身合成的必需脂肪酸，必须通过食物来摄取。目前人体EPA和DHA的补充主要来源于市售鱼油，但天然鱼油甘油酯中EPA和DHA含量普遍偏低(＜25％)，在医药和保健品领域不能满足人体的要求。因此通过市售天然鱼油富集EPA和DHA来满足人体需要具有极大的市场前景。DHA和EPA产品的富集形式主要有游离型、乙酯型、甘油酯型，其中游离型EPA和DHA因口味酸难以被人接受，且极易氧化腐败变质形成对人体有害的物质；乙酯型EPA和DHA食用难以被人体吸收消化，同时存在安全隐患；因而只有甘油酯型EPA和DHA能满足人体吸收消化需求，包括甘油二酯型EPA、DHA和甘油三酯型EPA、DHA。甘油二酯是甘油三酯(TAG)的一个脂肪酸被羟基取代的所形成的结构脂，由两个结构异构体1,2-DAG和1,3-DAG组成，是食用油天然组成的一部分。甘油二酯被美国食品药品监督局(FDA)列为安全食品(GRAS)，在食品领域具有广泛的应用。

目前富集EPA和DHA的方法分为传统方法和酶法富集。传统方法包括：低温结晶法、尿素包合法、分子蒸馏法、银离子络合法、超临界流体萃取法。传统方法在富集EPA和DHA中存在成本高、工艺复杂、产生大量固废、反应时间长、反应产率低等缺点，同时富集过程中还存在EPA和DHA的氧化损失。工业上富集EPA和DHA多采用酶法富集，其中主要是酶法合成甘油三酯型EPA、DHA进行富集。利用酶法催化富集EPA和DHA合成甘油三酯主要包括酯化、酯交换、水解三种催化形式，但由于EPA和DHA具有长碳链以及顺势双键，造成了EPA和DHA空间结构大，因而进行酯化和酯交换时，产率低且反应时间长，同时酶法合成甘油三酯型EPA和DHA前期需要用一些传统方法来富集游离EPA和DHA，存在传统方法固有的缺点。

李俊在其硕士论文《米曲霉脂肪酶制备高含量多不饱和脂肪酸鱼油的研究》中，以国产鳀鱼鱼油为原料，采用酶法醇解和酯酯交换反应两步法富集制备高含量EPA和DHA甘油酯产品，优化反应条件，反应48h后，产物甘油酯中EPA和DHA总含量可达到41.78％。李丽帆等人在《生物加工过程》2009年7卷6期发表了《固定化脂肪酶选择性水解废弃鱼油富集DHA和EPA甘油酯》，该文采用两次水解，第一次水解11.7h后进行第二次水解，经过两次水解，EPA和DHA质量分数分别从原始鱼油的4.2％和18.9％提高到8.5％和42％。刘芳在其硕士论文《酶法催化制备富含EPA和DHA甘油三酯研究》中，以精炼深海鱼油为原料，首先以脂肪酶Amano AY“Amano”400SD为催化剂对原料进行水解，然后用水解反应得到的甘油酯与浓缩鱼油乙酯在真空条件下通过酶催化酯交换反应合成甘油三酯，产品甘油酯中EPA和DHA的含量分别为25.3wt％、21.6wt％。上述这些方法均对EPA和DHA进行了一定量的富集，然而与本发明的两步水解法相比，上述方法存在反应时间长、能耗高、富集率低等缺点，同时上述方法富集得到的产品中含有一定量的单甘酯和游离脂肪酸，影响产品质量，不能作为工业富集EPA和DHA的方法。

发明内容