[发明专利]制备NT-proBNP/GDF15免疫层析试剂盒

权利要求书

1.一种快速定量检测NT-proBNP/GDF15免疫层析试剂盒，主要由免疫层析试纸卡，NT-proBNP/GDF15质控品和驱动液组成。

2.免疫层析试纸卡含有免疫层析试纸条，由PVC底板上顺序连接固定Fusion5、硝酸纤维素膜和吸水纸组成，所述的Fusion5吸附NT-proBNP抗体-微球和GDF15抗体-微球，所述的硝酸纤维素膜上固定有NT-proBNP抗体形成检测线1(T1线)，固定有GDF15抗体形成检测线2(T2线)，固定抗IgG抗体形成质控线(C线)。

3.根据权利要求2所述的微球可以是荧光微球，彩色微球，金标微球，磁性微球及上转换发光微球，本发明选用铕螯合物(Europium Chelate)荧光微球。

4.根据权利要求2所述的微球，表面修饰官能团为氨基、羧基、羟基的一种，微球直径为100-300nm，本发明选用直径200nm或300nm，羧基修饰的荧光微球。

5.根据权利要求2所述NT-proBNP抗体-微球和GDF15抗体-微球制备过程，步骤如下：

(1)用碳二亚胺(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)活化羧基修饰荧光微球；(2)加入NT-proBNP抗体或GDF15抗体进行偶联反应；(3)加入Tris液终止偶联反应；(4)洗涤后，用磷酸盐缓冲液悬浮NT-proBNP抗体-荧光微球和GDF15抗体-荧光微球，2-8℃，保存备用。

6.根据权利要求1所述的NT-proBNP/GDF15质控品，由冻干NT-proBNP/GDF15蛋白和蛋白稳定液两部分组成，其中冻干NT-proBNP/GDF15蛋白含有500-1000pg/ml NT-proBNP蛋白和1000-2000pg/ml GDF15蛋白，蛋白稳定液成分为10-100mM NaHPO₄，pH6.0-8.0，0.5-5.0mM EDTA，0.5-5.0mM DTT，20-200mM NaCl，2.0-20％BSA，1.0-10％Trehalose，0.1-1.0％Polyvinylpyrrolidone(PVP)，0.01-0.1％Tween20，0.01-0.1％NaN₃。

7.根据权利要求1所述的NT-proBNP/GDF15免疫层析试剂盒，同时检测血液或其他体液中NT-proBNP和GDF15浓度，用于早期诊断心力衰竭，判定心力衰竭风险分层及预测心力衰竭患者死亡风险。