[发明专利]用于不同组织再生的PRP凝胶组织工程复合物原位构建的方法与配方

权利要求书

1.一种用于不同组织再生的自体PRP凝胶组织工程复合物原位构建的配方，其特征在于：PRP凝胶包括如下原料：凝血酶冻干粉、葡萄糖酸钙注射液、PRP液。

2.据权利要求1所述的用于不同组织再生的PRP凝胶组织工程复合物原位构建的配方，其特征在于：PRP凝胶包括如下原料：凝血酶冻干粉、葡萄糖酸钙注射液、PRP液、间充质干细胞。

3.根据权利要求1所述的用于不同组织再生的PRP凝胶组织工程复合物构建的方法，其特征在于：

S1：无菌条件下，将2ml葡萄糖酸钙注射液注入2000 U的凝血酶冻干粉安瓿瓶内，摇匀直至充分溶解成葡萄糖酸钙/凝血酶混合液，用1ml注射器抽取该液0.5ml；

S2：用10ml注射器抽取PRP液4.5ml；

S3：将准备好的葡萄糖酸钙/凝血酶混合液0.5ml和自体PRP液4.5ml的注射器分别与移植枪内外套管针注射接口相连，同时同步将葡萄糖酸钙/凝血酶混合液与PRP注入盐水安瓿空瓶内，静置，得PRP凝胶，体外构建的凝胶液各成分比例为凝血酶活力为100U/ml，葡萄糖酸钙注射液浓度为10mg/ml，PRP液为4.5ml。

4.根据权利要求2所述的用于不同组织再生的PRP凝胶组织工程复合物原位构建的方法，其特征在于：

S1：无菌条件下，将2ml葡萄糖酸钙注射液注入2000 U的凝血酶冻干粉安瓿瓶内，摇匀直至充分溶解成葡萄糖酸钙/凝血酶混合液，用1ml注射器抽取该液0.5ml；

S2：用10ml注射器抽取PRP液4.5ml；

S3：在肌骨超声引导下，将准备好的葡萄糖酸钙/凝血酶混合液0.5ml和PRP液4.5ml的注射器分别与移植枪内外套管针注射接口相连，同时同步将葡萄糖酸钙/凝血酶混合液与PRP注入病损部位。

5.根据权利要求2所述的用于不同组织再生的PRP凝胶组织工程复合物原位构建的方法，包括如下步骤：

S1：影像引导下利用干细胞移植枪穿刺套管针进行穿刺，针尖精准定位于靶部位；

S2：在相同的时间内通过穿刺套管针两个相互隔离的通道同步将血小板活化剂即0.2ml葡萄糖酸钙液和2ml的PRP注入体内靶点部位；

S3：这两种液体在流出针尖前的瞬间得以充分混合，在靶部位形成与病损形状大小吻合的细胞凝胶复合物支架。

6.根据权利要求2所述的用于不同组织再生的PRP凝胶组织工程复合物原位构建的方法，其特征在于：

间充质干细胞为骨髓间充质干细胞，骨髓间充质干细胞的获取方法如下：用含有肝素抗凝液的注射器获取骨髓血200ml，将获取的骨髓血打入医用无菌采血袋中；

将骨髓血与等体积的PBS混合，室温条件下静置30min，离心分离，弃上清液取细胞，细胞用PBS清洗2次；再用弃去上清液等量的培养基悬浮细胞，其有核细胞数在(1～2)×10⁷个/ml。

7.根据权利要求5所述的用于不同组织再生的PRP凝胶组织工程复合物原位构建的方法，其特征在于：

离心分离方式如下：吸取密度位1.073g/mlPercoll溶液上，使其与分离液比例为1：1；用水平离心机2000r/min条件下离心20～40min，使离心管内液体从上至下分为三层，上层为血小板、中层为分离液、底层为红细胞和多核白细胞，在上、中层液体界面处可见乳白色混浊的单个核细胞层；

将吸管插入到上、中层液体界面处的单个核细胞层，沿试管边缘吸取有核细胞移入另一离心管中；用≥5倍的培养基悬浮细胞，再用水平离心机在2000r/min条件下离心10min，弃上清液取细胞；用培养基再悬细胞，计数，用2％苔盼蓝测定细胞活力，调节细胞浓度为1×10⁶个/ml。

8.根据权利要求6所述的用于不同组织再生的PRP凝胶组织工程复合物原位构建的方法，其特征在于：

骨髓间干细胞培养方式如下：按1.5×10⁵个/cm²底面积接种到培养皿，在37℃、饱和湿度、5％CO₂培养箱培养，培养48h后，可见少量细胞贴壁，2w后达到85％细胞融合，即可进行消化、传代接种以及条件培养基诱导培养，扩增至第3-5代使用。通过细胞计数后重悬，调整到每ml营养液中含间充质干细胞2×10⁶个/ml。