[发明专利]一种高危型HPV核酸检测假病毒标准物质

权利要求书

1.一种高危型HPV假病毒颗粒作为HPV核酸检测的假病毒标准物质的用途，其中所述高危型HPV假病毒颗粒由下述制备方法得到：将编码HPV衣壳蛋白的L1基因连入腺病毒载体，转染293细胞，收集假病毒颗粒，纯化假病毒颗粒；其中，所述纯化步骤如下：

（1）超声处理所述腺病毒颗粒，保留上清液；

（2）向上清液中加入Dnase Ⅰ处理；

（3）采用10⁴-10⁶g超速离心1-3小时，收集沉淀；

（4）取溶解后的样品加入超速离心管中，并依次加入20%，40%和60%的蔗糖，0.7×10⁵g -1.5×10⁵g离心2-4小时，将分布于蔗糖条带之间的腺病毒颗粒吸取出来；

（5）溶解后再次于0.8×10⁵g -1.5×10⁵g离心2-4小时，溶解沉淀；

（6）向（5）中得到的腺病毒溶液中加入的PEG6000，使其终浓度为40%-60%；

（7）利用磁力搅拌器搅拌过夜，后于7000g-8000g离心20min-40min，收集溶解病毒沉淀；溶解病毒沉淀后，再次于7000g-8000g离心20 min-40min，收集沉淀；

所述用途是利用含有保护剂的溶液重新溶解第（7）步所得到的沉淀以作为HPV核酸检测的假病毒标准物质，并对其进行数字PCR定值，进行分装和冻存；所述保护剂是海藻糖和牛血清白蛋白作为保护剂，且海藻糖浓度不低于10％、牛血清白蛋白不低于5％。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述HPV是HPV16或HPV18。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述编码HPV衣壳蛋白的L1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述第（2）步中加入DnaseⅠ于37℃处理4-6小时。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述对标准物质的数字PCR定值是通过针对HPV L1基因的数字PCR方法进行定量检测，以标准物质中L1基因的拷贝数浓度作为其量值。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述保护剂是含有10%海藻糖和5%牛血清白蛋白作为保护剂。

7.如权利要求1至6任一项所述的用途，其特征在于，将所述假病毒标准物质于室温以下温度保存。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，将所述假病毒标准物质于低于4℃的温度下进行保存。