[发明专利]脐带间充质干细胞提取物、应用及检测方法

说明书

本发明提供一种脐带间充质干细胞提取物、应用及检测方法，化妆品技术领域，其中脐带间充质干细胞提取物，其由下述步骤提取得到，(1)从脐带组织块或脐血中分离得到脐带间充质干细胞；(2)将步骤（1）得到的脐带间充质干细胞定向分化为皮肤干细胞；(3)将步骤（2）得到的皮肤干细胞收集和裂解，并通过分子筛将活性小分子物质进行富集得到脐带间充质干细胞提取物；本发明的这类小分子物质在常温可以保存比较长的时间，并且对皮肤屏障的修复能力明显增强。

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种脐带间充质干细胞提取物、应用及检测方法。

背景技术

随着生活水平的提高与科技的进步，以往的美白、保湿等基本功能已不能满足人们对化妆品的需求，抗衰老逐渐成为大家关心的方面。在皮肤老化的过程中，活性氧是皮肤老化的重要诱因，且内源性老化和外源性老化是同时作用的。内源性老化主要是随着年龄的增长，氧化及糖化的蛋白质逐渐累积，使得真皮中胶原蛋白和弹性蛋白损失，皮肤变薄，角质形成细胞变性。外源性老化则是因为紫外线损伤、环境损害、发炎等，导致表皮组织的恶化和损伤。

间充质干细胞是来源于早期中胚层的成体干细胞，具有高度自我更新能力和多向分化潜能，是造血微环境中的一种重要的细胞成分，可以向多种组织如骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质细胞增殖分化，而且免疫原性弱，是组织工程立项的种子细胞来源。人脐带间充质干细胞相比于其他来源的间充质干细胞，还具有提取方便，含量丰富，细胞纯净，免疫原性更低，细胞原始、分化能力更强，无伦理限制等优势，可为实验和临床提供充足的细胞来源，具有广阔的临床应用前景。研究发现人脐带间充质干细胞的培养上清中含有多种细胞因子，如血管内皮生长因子，肝细胞生长因子，碱性成纤维细胞生长因子，表皮生长因子，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，转化生长因子β，神经生长因子等。而这些因子对于皮肤伤口的愈合及细胞外基质的重建，胶原和弹性蛋白的稳定生产及分布具有重要作用。

目前市场上传统的精华液主要是利用外源性物质，如通过植物成分提取或精细化工制作工艺加工而成的，虽然对肌肤能产生短暂的改善效果，但并未从根本上改变皮肤的衰老和修复问题。申请号为CN201910177644.0，发明名称为一种用于常规抗衰老治疗的人源脐带间充质干细胞制剂的制备方法公开了包括脐带组织块的获取步骤、干细胞的原代培养步骤、干细胞的传代培养步骤、干细胞的冻存步骤、干细胞的复苏与培养步骤和人源脐带间充质干细胞制剂的制备步骤；所述人源脐带间充质干细胞制剂的制备步骤包括采用5%葡萄糖注射液重悬传代培养至Pe代人源脐带间充质干细胞，本发明完善人源脐带间充质干细胞的储备，保障了人源脐带间充质干细胞的存活率、增殖能力和特异性。但是，现有技术使用的间充质干细胞本身以及其分泌的旁分泌因子或者外泌体，这对皮肤屏障修复能力差，并且不能常温保存，所以在应用至皮肤修复上效果会大打折扣。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种脐带间充质干细胞提取物，以解决现行技术中脐带间充质干细胞提取物在常温保存活性成分易失活的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明提供一种脐带间充质干细胞提取物，其由下述步骤提取得到：(1)从脐带组织块或脐血中分离得到脐带间充质干细胞；(2)将步骤（1）得到的脐带间充质干细胞定向分化为皮肤干细胞；(3)将步骤（2）得到的皮肤干细胞收集和裂解，并通过分子筛将活性小分子物质进行富集得到脐带间充质干细胞提取物。

优选的，其由下述步骤提取得到：其由下述步骤提取得到：(1)从脐带组织块中分离得到脐带间充质干细胞；(2)将步骤（1）得到的脐带间充质干细胞定向分化为皮肤干细胞；(3)将步骤（2）得到皮肤干细胞正常培养18～36h后，再置于氧气5%、二氧化碳5%、氮气90%的低氧环境下培养18～36h后，收集并裂解得到的皮肤干细胞，并通过孔径为0.3～2.0nm分子筛得到活性小分子物质，将活性小分子物质进行富集得到脐带间充质干细胞提取物。

优选的，步骤（1）中，所述脐带间充质干细胞是从脐带组织块或脐血中经过原代培养步骤、干细胞的传代培养步骤、干细胞的冻存步骤、干细胞的复苏与培养步骤和人源脐带间充质干细胞制剂的制备步骤得到的。