[发明专利]脐带间充质干细胞提取物、应用及检测方法

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞提取物，其特征在于，其由下述步骤提取得到：(1)从脐带组织块或脐血中分离得到脐带间充质干细胞；(2)将步骤（1）得到的脐带间充质干细胞定向分化为皮肤干细胞；(3)将步骤（2）得到的皮肤干细胞收集和裂解，并通过分子筛将活性小分子物质进行富集得到脐带间充质干细胞提取物。

2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞提取物，其特征在于，其由下述步骤提取得到：(1)从脐带组织块中分离得到脐带间充质干细胞；(2)将步骤（1）得到的脐带间充质干细胞定向分化为皮肤干细胞；(3)将步骤（2）得到皮肤干细胞正常培养18～36h后，再置于氧气5%、二氧化碳5%、氮气90%的低氧环境下培养18～36h后，收集并裂解得到的皮肤干细胞，并通过孔径为0.3～2.0nm分子筛得到活性小分子物质，将活性小分子物质进行富集得到脐带间充质干细胞提取物。

3.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞提取物，其特征在于，步骤（1）中，所述脐带间充质干细胞是从脐带组织块或脐血中经过原代培养步骤、干细胞的传代培养步骤、干细胞的冻存步骤、干细胞的复苏与培养步骤和人源脐带间充质干细胞制剂的制备步骤得到的。

4.根据权利要求3所述的脐带间充质干细胞提取物，其特征在于，步骤（1）中，所述脐带间充质干细胞的原代培养步骤包括将脐带组织块贴壁接种至培养皿中，温度为37℃、体积分数为5%的CO₂培养箱中静置1～2h，向培养皿中加入完全培养液培养，每隔3天半量更换完全培养液，静置培养14天后，弃掉培养液及脐带组织块，采用生理盐水清洗细胞，加入0.5wt%的Tryple-Express消化液，温度为37℃静置2～3分钟，待伪足完全回缩，细胞变圆，加入完全培养液终止消化，吹打得到P1代人源脐带间充质干细胞悬液。

5.根据权利要求3所述的脐带间充质干细胞提取物，其特征在于：在步骤（2）中，所述培养液的组成为：胰岛素20mg/L、L-谷氨酰胺5mg/L、表皮生长因子8μg/L、成纤维细胞生长因子2μg/L、神经生长因子0.88μg/L、糖皮质激素175μg/L、黄芩甙元0.1mg/L和飞燕草素35μg/L。

6.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞提取物，其特征在于：在步骤（2）中，将步骤（1）得到的胎盘间充质干细胞接种在皮肤干细胞培养基中，于37℃、5％CO₂、培养箱中孵育15～25h，弃去培养基，重新加入新鲜的皮肤干细胞培养基中，待皮肤干细胞接近80～90％融合时，进行传代扩增培养。

7.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞提取物，其特征在于：在步骤（2）还包括将定向分化得到的皮肤干细胞采用0.1%胰酶消化，用生理盐至少清洗一次。

8.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞提取物，其特征在于：在步骤（3）中，所述皮肤干细胞采用冰浴超声破碎对皮肤干细胞进行裂解，冰浴超声破碎条件为间歇超声，超声破碎的功率300～350W，每工作10s，间歇3s，循环至少20次。

9.根据权利要求1-8任意一项所述脐带间充质干细胞提取物的应用，其特征在于：所述的脐带间充质干细胞提取物用于制备美容产品。

10.一种脐带间充质干细胞提取物的检测方法：其特征在于，采用反相液质联用方法。