[发明专利]一种重组人血小板衍生因子(rhPDGF-BB)-Fc融合蛋白及其使用在审
| 申请号: | 202110802140.0 | 申请日: | 2021-07-15 |
| 公开(公告)号: | CN113735979A | 公开(公告)日: | 2021-12-03 |
| 发明(设计)人: | 肖业臣;宗文博;辛本凯 | 申请(专利权)人: | 吉林大学;肖业臣 |
| 主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/81;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/14;A61K38/18;A61K47/68;A61K9/06;A61P17/02 |
| 代理公司: | 安徽顺超知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 34120 | 代理人: | 徐文恭 |
| 地址: | 130015 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 重组 血小板 衍生 因子 rhpdgf bb fc 融合 蛋白 及其 使用 | ||
1.一种重组人血小板衍生因子(rhPDGF-BB)-Fc融合蛋白,其特征在于:该融合蛋白由人PDGF-BB和人IgG Fc1片段组成。
2.如权利要求1所述的重组人血小板衍生因子(rhPDGF-BB)-Fc融合蛋白,其特征在于:所述融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.含有权利要求2所述的重组人血小板衍生因子(rhPDGF-BB)-Fc融合蛋白的重组表达载体。
4.如权利要求3所述的重组表达载体,其特征在于:该重组表达载体为毕赤酵母表达载体。
5.一种如权利要求1所述的融合蛋白的制备方法,其特征在于:该制备方法包括如下步骤:
1)构建编码rhPDGF-BB-Fc融合蛋白的基因表达载体:
采用人工合成方法获得编码rhPDGF-BB-Fc融合蛋白的基因,获得含有rhPDGF-BB-Fc融合蛋白基因的重组表达载体;
2)rhPDGF-BB-Fc融合蛋白在酵母细胞中的稳定表达:
将含有rhPDGF-BB-Fc融合蛋白基因的表达载体转入到酵母细胞中,筛选稳定表达的rhPDGF-BB-Fc融合蛋白的菌株;
3)高密度培养rhPDGF-BB-Fc融合蛋白:
将筛选稳定的菌株于发酵罐中高密度培养,收集含有rhPDGF-BB-Fc融合蛋白的培养液上清。
6.一种如权利要求1所述的融合蛋白的纯化方法,其特征在于:该纯化方法包括如下步骤:
1)rhPDGF-BB-Fc融合蛋白发酵液初处理:
采用切向流过滤装置,对发酵液上清进行微滤和超滤处理;
2)ProteinA亲和层析:
上清经微滤和超滤处理后,离心收集,根据融合蛋白偶联Fc片段的特性,利用亲和ProteinA柱层析。
7.一种蛋白凝胶剂,其特征在于:该蛋白凝胶剂包含药学上可接受的赋形剂,以及有效量的如权利要求1所述的重组人血小板衍生因子(rhPDGF-BB)-Fc融合蛋白,该融合蛋白作为蛋白凝胶剂的活性成分。
8.根据权利要求7所述的蛋白凝胶剂在促进伤口愈合方面的应用。
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