[发明专利]新型冠状病毒RBD蛋白的制备方法以及新型冠状病毒疫苗

说明书

本发明公开了新型冠状病毒RBD蛋白的制备方法以及新型冠状病毒疫苗，涉及基因工程技术领域。本发明公开的制备方法采用高效表达RBD蛋白的如SEQ ID NO.1所示核酸序列表达RBD蛋白，有效提高RBD蛋白的表达水平，大幅提高RBD蛋白产量，降低成本，本发明为新型冠状肺炎的疫苗研发奠定了基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及新型冠状病毒RBD蛋白的制备方法以及新型冠状病毒疫苗。

背景技术

新型冠状病毒是通过刺突蛋白S与ACE2受体作用来感染人体细胞，且较SARS病毒而言，新型冠状病毒的S蛋白与ACE2的亲和力更强，因此S蛋白有助于疫苗的研发，该序列已发布于NCBI(MN908947.3)。后续通过解析S蛋白的结构发现，S1亚基中的RBD会经历铰链式运动，该运动可使受体的可结合部位不稳定，因此S蛋白的RBD(319-541aa)区域可作为疫苗设计的位点。

目前针对RBD蛋白的表达系统的蛋白产量较低。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供新型冠状病毒RBD蛋白的制备方法以及新型冠状病毒疫苗。本发明的制备方法采用高效表达RBD蛋白的核酸序列表达RBD蛋白，有效提高RBD蛋白的表达水平，大幅提高RBD蛋白产量，降低成本，本发明为新型冠状肺炎的疫苗研发奠定了基础。

本发明是这样实现的：奠定了基础

一方面，本发明提供一种分离的核酸分子，其编码新型冠状病毒的RBD蛋白，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明通过对野生型新型冠状病毒的S(Spike)基因的RBD序列进行分析，依毕赤酵母密码子偏好性、结合GC含量以及CpG岛等多种参数对该野生型RBD序列进行密码子优化，得到了能够在毕赤酵母中高效表达的核酸序列，如SEQ ID NO.1所示，采用该酸序列表达RBD蛋白，能够给大幅度提高RBD蛋白产量，降低成本，为新型冠状肺炎的疫苗研发奠定基础。

另一方面，本发明提供一种重组载体，其含如上所述的核酸分子。

可选地，在本发明的一些实施方案中，所述重组载体为克隆载体或表达载体。

需要说明的是，本领域技术人员根据需要，可以将上述核酸分子连接至任何合适的载体，包括但不限于克隆载体或表达载体。

可选地，在本发明的一些实施方案中，所述重组载体为pPICZαA。

另一方面，本发明提供一种重组细胞，其含有如上所述的核酸分子，或如上所述的重组载体。

可选地，在本发明的一些实施方案中，所述重组细胞为昆虫细胞、哺乳动物细胞、细菌或酵母。

需要说明的是，本领域技术人员根据需要，可以将上述核酸分子或上述重组载体导入任何感兴趣的宿主细胞中，包括但不限于昆虫细胞、哺乳动物细胞、细菌(如大肠杆菌)或酵母，无论何种宿主细胞，均属于本发明的保护范围。

可选地，在本发明的一些实施方案中，所述酵母为毕赤酵母。

另一方面，本发明提供一种新型冠状病毒RBD蛋白的制备方法，其包括：将如上所述的核酸分子导入宿主细胞并进行表达，从培养产物中获得RBD蛋白。

该制备方法采用如SEQ ID NO.1所示核酸分子表达生产RBD蛋白，能够大幅度提高RBD蛋白产量，降低成本，为新型冠状肺炎疫苗的开发奠定基础。

可选地，在本发明的一些实施方案中，所述宿主细胞为毕赤酵母。

毕赤酵母系统为真核细胞表达系统，具有低成本，高产出，具有翻译后修饰等优点，得到的RBD蛋白能够保持其免疫原性，用该方法得到的RBD蛋白免疫动物，能够刺激机体产生有效的中和抗体。