[发明专利]一种鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条及其检测方法

说明书

本发明提出一种鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条及其检测方法，试纸条自一端至另一端依次设有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线；检测线靠近金标垫一端设置，质控线靠近吸水垫一端设置；金标垫上设有与胶体金偶连的单克隆抗体，单克隆抗体由保藏号为D8的杂交瘤细胞株分泌产生；检测线由保藏号为E8的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体构成；质控线由羊抗鼠抗体构成。本发明的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，由于采用了可相互配对的单克隆抗体分别喷涂于金标垫和检测线，对鲍氏志贺氏菌的检测特异性和灵敏度均较高，具有操作简便，低成本快速检测的特点，可实现对大量鲍氏志贺氏菌样品的现场监控。

技术领域

本发明涉及细菌检测技术领域，尤其涉及一种鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条。

背景技术

鲍氏志贺氏菌是一种革兰氏阴性短小杆菌，是人类和灵长类动物的肠道致病菌。鲍氏志贺氏菌主要通过粪-口途径传播，感染后引发腹痛、腹泻，严重时可能导致神经衰弱等症状。该食源性致病菌主要存在于沙拉(虾、土豆、鸡)、生蔬菜、奶类、水果和面包制品中。在食物的生产、加工和运输中，由于交叉感染，易导致鲍氏志贺氏菌感染事件的大规模爆发。

目前，鲍氏志贺氏菌检测主要依赖于国标规定的传统培养法及生化鉴定，其被视为鲍氏志贺氏菌检测的金标准。但是，该方法检测耗时，操作繁琐，不适合大批量样品检测。实验室常用的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)进行鲍氏志贺菌的检测，其灵敏度高，但需依靠专业的设备和操作人员，耗时长。免疫学检测由于检测周期短、操作方便、灵敏度较高，成为近年来发展迅速的检测手段。但是，我国目前尚未有可用于鲍氏志贺氏菌检测的快速检测产品。该专利以鲍氏志贺氏菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及鲍氏志贺氏菌的快速检测产品。

发明内容

本发明的目的在于提出一种对鲍氏志贺氏菌实现有效检测，并且灵敏度高，用料节约，经济性优的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条及其检测方法。

为达到上述目的，本发明提出一种鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，所述试纸条自一端至另一端依次设有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；

所述硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线；所述检测线靠近所述金标垫一端设置，所述质控线靠近所述吸水垫一端设置；

所述金标垫上设有与胶体金偶连的单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏号为D8的杂交瘤细胞株分泌产生；所述检测线由保藏号为E8的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体构成；所述质控线由羊抗鼠抗体构成。

进一步的，还包括一块背衬，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均承载于所述背衬上。

根据权利要求1所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，在与胶体金偶连的单克隆抗体中，所述胶体金的粒径为30～40nm，所述胶体金与单抗的质量体积比为3μg/mL。

进一步的，所述胶体金的最适pH确定如下：

取多组胶体金溶液，每组溶液中加入不同量的0.2mol/L碳酸钾调整溶液调节所述胶体金溶液的pH，并且加入D8单克隆抗体进行反应，随后加入10μL10％NaCl溶液持续反应，进行离心操作，离心后观察到胶体金颜色最红，无聚沉、无褪色或变色现象的该组胶体金溶液为胶体金的最适pH。

进一步的，D8单克隆抗体与胶体金偶联的最佳结合量为：

取多组最适pH的胶体金溶液，每一组加入不同量的D8单克隆抗体，反应后，每一组均加入10μL 10％NaCl溶液，取颜色最红且抗体用量最少的为最小结合量xμg/mL，为保证胶体金完全与抗体结合，以x+x×2为最佳结合量。