[发明专利]一种牛源肝素钠的提取精制方法

权利要求书

1.一种牛源肝素钠的提取精制方法，其特征在于，其包括如下步骤：

（1）盐解：将牛源粗品肝素溶于纯化水中，加入溶液体积1%~5%氯化钠搅拌溶解，将溶液升温至45~55℃，用盐酸调溶液pH值8.0~9.0，保温搅拌1~3h；

（2）酶解：在步骤（1）的反应液中加入反应液质量0.1%~1%的蛋白酶，保温45~55℃酶解3~5h，反应结束，将反应液迅速升温至85~95℃，保温10~30min；然后降温至30℃以下；

（3）柱层析离子交换：将步骤（2）得到的酶解液经离子交换柱吸附，然后用1~2mol/L氯化钠洗涤，洗涤10~15倍柱床体积时停止洗涤，换用5~8倍柱床体积的4~5mol/L氯化钠溶液进行洗脱，收集洗脱液；

（4）超滤：使用超滤机将洗脱液超滤浓缩至原体积的1/5~1/4；

（5）醇沉：向步骤（4）所得浓缩液中加入95%乙醇，当加入的乙醇体积为浓缩液体积的0.8~1.2倍时，停止加入，搅拌10~30min，然后在15~35℃下静置，静置3~10h后沉淀物与上清液分层，收集沉淀物；

（6）氧化：将步骤（5）所得沉淀物加水溶解后，用氢氧化钠溶液调节溶液pH为9.0~11.5，然后升温到30~60℃，分3步加入浓度为30%的过氧化氢，氧化8~24h；

（7）沉淀：将步骤（6）所得溶液pH调为6.0~7.0，然后将溶液经微孔滤膜过滤后，向滤液中加入滤液体积1.5~2.5倍量的95%乙醇，常温静置8~16h，收集沉淀物；

（8）膜过滤：将步骤（7）所得沉淀物加入纯化水溶解后，经微孔滤膜过滤，收集滤液；

（9）干燥：将步骤（8）所得滤液分装至冷冻干燥盘中，真空干燥后制得注射级牛源肝素钠。

2.根据权利要求1所述的一种牛源肝素钠的提取精制方法，其特征在于，步骤（1）中，每0.7亿单位的牛源粗品肝素溶于8L纯化水中。

3.根据权利要求1所述的一种牛源肝素钠的提取精制方法，其特征在于，步骤（3）中，离子交换柱为阴离子交换柱。

4.根据权利要求1所述的一种牛源肝素钠的提取精制方法，其特征在于，步骤（6）中，所述过氧化氢的添加量为沉淀物加水溶解后体积的1-5%。

5.根据权利要求4所述的一种牛源肝素钠的提取精制方法，其特征在于，步骤（6）中，所述过氧化氢的分步加入过程为：第1步加入过氧化氢总量的30~40%，反应1~3h；第2步加入过氧化氢总量的30~40%，反应1~3h；第3步加入过氧化氢总量的20~40%，搅拌反应至氧化结束。

6.根据权利要求4所述的一种牛源肝素钠的提取精制方法，其特征在于，步骤（7）和步骤（8）中，所述微孔膜过滤时的微孔孔径为0.22~0.45μm，压力为0.2~0.4MPa。