[发明专利]一种鸽新城疫Ⅵb亚型阳性血清标准品及其制备方法

说明书

本发明涉及一种Ⅵb亚型鸽新城疫阳性血清标准品的制备方法。该方法中制备的阳性血清标准品HI效价不低于1:128，中和效价不低于1:1600，血清能够完全中和Ⅵb亚型鸽新城疫病毒，用于血凝抑制试验阳性对照标准品和疫苗种毒特异性及外源病毒检验，在血凝抑制试验中能够保证抗体检测结果的准确性，充分反映鸽子免疫后的抗体水平，为鸽群中Ⅵb亚型新城疫流行毒株的准确监测、鸽新城疫种毒的免疫原性、特异性检验、外源病毒检验和疫苗免疫效力评价提供保障。本发明填补了研制Ⅵb亚型鸽新城疫疫苗及流行病学调查无标准阳性血清的空白。该阳性血清的制备包括鸽新城疫LY/2020/Pi株灭活疫苗的制备、动物的筛选、动物免疫程序、阳性血清的制备纯化及检验。

技术领域

本发明涉及一种鸽新城疫Ⅵb亚型阳性血清标准品及其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

鸽新城疫是由鸽副黏病毒Ⅰ型(pigeon paramyxovirus-1，PPMV-1)引起的流行于鸽群中的一种高度接触性传染病，临床症状同鸡新城疫相似。该病流行特点为新疫区传播迅速，发病率100％，死亡率80％以上，老疫区耐过鸽群存在带毒情况，发病率、死亡率较低，呈散发性。近几年，随着我国养鸽业的迅速发展，该病的发生呈上升趋势，甚至一些养鸽场呈暴发流行，给养鸽业带来较大的经济损失。近几年的流行调查显示，我国鸽群中流行的鸽新城疫病毒以基因Ⅵb亚型为主，与当前世界上流行的新城疫病毒优势基因Ⅶ亚型存在抗原性差异，对鸽具有明显的宿主特异性。

近几年从鸽群中分离的鸽新城疫毒株与常规鸡新城疫疫苗株La Sota株的遗传距离较远，它们的核苷酸和氨基酸与新城疫疫苗株La Sota的同源性相对较低，仅为82％～84％；在交叉病毒中和试验中，基因Ⅵ型的鸽源毒株与La Sota株间的抗原同源性低至65％左右。在交叉血凝抑制试验中，两者测定的HI效价相差2～3个滴度。

本发明是通过Ⅵb亚型鸽新城疫毒株LY/2020/Pi株制备的灭活疫苗多次免疫经筛选的阴性鸽后获得阳性血清标准品。该阳性血清标准品的研制可为鸽群中Ⅵb亚型新城疫流行毒株的准确监测、鸽新城疫种毒的免疫原性评价、特异性检验、外源病毒检验及疫苗免疫效力评价提供保障，同时可填补研制Ⅵb亚型鸽新城疫疫苗无标准阳性血清的空白。

发明内容

本发明的目的在于通过多次免疫阴性鸽后获得鸽新城疫的阳性血清标准品，用于Ⅵb亚型鸽新城疫疾病的监测、鸽源新城疫疫苗毒种的免疫原性评价、特异性检验、外源病毒检验和疫苗免疫效力的评价等。

为了实现上述目的，本发明采取了如下技术方案：

1.一种鸽新城疫Ⅵb亚型阳性血清标准品，其特征在于所述阳性血清标准品是用Ⅵb亚型鸽新城疫病毒LY/2020/Pi株抗原免疫接种健康阴性鸽；

所述的免疫抗原为鸽新城疫病毒Ⅵb亚型毒株LY/2020/Pi株疫苗，其制备方法为：用鸽新城疫病毒Ⅵb亚型毒株LY/2020/Pi株接种SPF鸡胚培养，收获感染鸡胚液，经β-丙内酯灭活后，与矿物油佐剂混合乳化制成；

所述鸽新城疫病毒LY/2020/Pi株是由中崇信诺生物科技泰州有限公司分离、提供，该毒株将送交中国科学院微生物研究所中国微生物保藏委员会普通微生物保藏中心保藏，保藏号为：CGMCC No.20289。

2.本发明所述一种鸽新城疫Ⅵb亚型阳性血清标准品的制备方法，包括：

(1)免疫用健康阴性鸽的筛选：

1)选择饲养管理条件好且满足以下条件的鸽群：采食、饮水、生长发育均正常，羽毛有光泽，警惕性强，粪便呈螺旋状，且带一点白色尿素；无细菌、病毒、寄生虫等发病史；

2)对试验鸽逐只采血，检测血清中新城疫抗体，剔除HI抗体高于1:4者；

3)应用鸽圆环病毒、鸽腺病毒、鸽痘检测试剂盒逐只检测各病毒感染情况，剔除阳性或可疑者；