[发明专利]一种大鼠血管平滑肌细胞培养基及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种大鼠血管平滑肌细胞培养基及其应用，其中大鼠血管平滑肌细胞培养基包括DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素‑链霉素混合液和大鼠血小板源性生长因子B。大鼠血小板源性生长因子B能够促进血管平滑肌细胞分裂增生，本发明提供的大鼠血管平滑肌细胞培养基缩短了血管平滑肌原代细胞的培养周期，提高其纯度和活性，并降低培养基的成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种大鼠血管平滑肌细胞培养基及其应用。

背景技术

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）是血管壁的主要细胞成分，在动脉粥样硬化、血管成形、术后再狭窄等病理过程的形成和发展中发挥重要作用。体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌原代细胞，是研究VSMCs增殖、迁移以及细胞表型转化的重要基础。目前大鼠胸主动脉VSMCs原代培养方法主要包括酶消化法和组织贴块法。但是存在如下缺点：

第一，现有的酶消化法成本较高，获得的细胞活性较差，易污染；

第二，采用现有组织贴块法获得VSMCs的培养周期长，其中，组织块周围一般要8天左右才有细胞爬出，2周左右细胞开始融合，并且获得细胞纯度较低（只有70%-80%），影响后续研究进展。

第三，为了缩短VSMCs原代培养周期，市场上已出现一些专门用于培养原代平滑肌细胞的原代细胞培养基，但是这些培养基中添加了组织特异性基质成分来提高培养效率，相比于普通的培养基来说，比如DMEM培养基，价格昂贵，大大提高成本。

第四，由于VSMCs具有喜密不喜疏的特点，在采用现有组织贴块法进行VSMCs原代培养的实际操作过程中，组织块很容易脱落，从而造成组织块过于稀疏，致使爬出的细胞数量太少而影响细胞的融合。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种大鼠血管平滑肌细胞培养基，该大鼠血管平滑肌细胞培养基通过组织贴块法培养原代VSMCs，能够缩短培养周期、降低成本。

本发明的目的之二在于提供一种大鼠血管平滑肌细胞培养基在培养大鼠血管平滑肌细胞中的应用。

本发明的目的之三在于提供一种大鼠血管平滑肌细胞的培养方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：一种大鼠血管平滑肌细胞培养基，包括DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液和大鼠血小板源性生长因子B。

作为一种实施方式，所述胎牛血清的体积分数为15%～25%，所述青霉素-链霉素混合液的体积分数为0.5%～2%，所述大鼠血小板源性生长因子B的终浓度为5ug/L～20ug/L。

作为一种实施方式，所述胎牛血清的体积分数优选为20%，所述青霉素-链霉素混合液的体积分数优选为1%，所述大鼠血小板源性生长因子B的终浓度优选为10ug/L。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：上述的大鼠血管平滑肌细胞培养基在培养大鼠血管平滑肌细胞中的应用。

本发明的目的之三采用如下技术方案实现：一种大鼠血管平滑肌细胞的培养方法，包括以下步骤：

步骤1，将细胞培养瓶平向放置，采用鼠尾胶原蛋白Ⅰ型包被细胞培养瓶的瓶壁；

步骤2，获取大鼠胸腹主动脉，清洗并剪成0.8 mm2～1.5mm2的组织块；

步骤3，将步骤2获得的组织块贴放于经步骤1处理的细胞培养瓶之包被有鼠尾胶原蛋白Ⅰ型的瓶壁上；

步骤4，将经步骤3处理的细胞培养瓶竖向放置，加入如权利要求1至3任一项所述的大鼠血管平滑肌细胞培养基，并竖向置于培养箱中静置培养2h；

步骤5，将经步骤4处理的细胞培养瓶平向放置，使组织块浸没于大鼠血管平滑肌细胞培养基中进行培养，获得大鼠血管平滑肌细胞。