[发明专利]一种大鼠血管平滑肌细胞培养基及其应用

权利要求书

1.一种大鼠血管平滑肌细胞培养基，其特征在于，包括DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液和大鼠血小板源性生长因子B。

2.如权利要求1所述的大鼠血管平滑肌细胞培养基，其特征在于，所述胎牛血清的体积分数为15%～25%，所述青霉素-链霉素混合液的体积分数为0.5%～2%，所述大鼠血小板源性生长因子B的终浓度为5ug/L～20ug/L。

3.如权利要求2所述的大鼠血管平滑肌细胞培养基，其特征在于，所述胎牛血清的体积分数优选为20%，所述青霉素-链霉素混合液的体积分数优选为1%，所述大鼠血小板源性生长因子B的终浓度优选为10ug/L。

4.权利要求1至3任一项所述的大鼠血管平滑肌细胞培养基在培养大鼠血管平滑肌细胞中的应用。

5.一种大鼠血管平滑肌细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将细胞培养瓶平向放置，采用鼠尾胶原蛋白Ⅰ型包被细胞培养瓶的瓶壁；

步骤2，获取大鼠胸腹主动脉，清洗并剪成0.8 mm²～1.5mm²的组织块；

步骤3，将步骤2获得的组织块贴放于经步骤1处理的细胞培养瓶之包被有鼠尾胶原蛋白Ⅰ型的瓶壁上；

步骤4，将经步骤3处理的细胞培养瓶竖向放置，加入如权利要求1至3任一项所述的大鼠血管平滑肌细胞培养基，并竖向置于培养箱中静置培养2h；

步骤5，将经步骤4处理的细胞培养瓶平向放置，使组织块浸没于大鼠血管平滑肌细胞培养基中进行培养，获得大鼠血管平滑肌细胞。

6.如权利要求5所述的大鼠血管平滑肌细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤1中，采用浓度为0.36 g/L的乙酸将鼠尾胶原蛋白Ⅰ型稀释至浓度为0.012 mg/mL～0.015 g/L后进行包被处理。

7.如权利要求5所述的大鼠血管平滑肌细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤2包括如下步骤：

步骤2.1，选择四周龄、重量150g的大鼠，处死后置于75%乙醇中浸泡消毒3 min；

步骤2.2，分离取出大鼠胸、腹主动脉，放入预冷的含双抗的PBS缓冲液中，反复浸洗2～3遍，并去除血管外膜的脂肪和纤维组织；其中，所述双抗为青霉素和链霉素的混合液；

步骤2.3，纵向剪开血管腔，去除血管内皮细胞，采用预冷的含双抗PBS缓冲液洗至少1遍；

步骤2.4，将经步骤2.3处理的血管段置于0.25%胰蛋白酶溶液中预消化10min，然后置入预冷的如权利要求1至3任一项所述的大鼠血管平滑肌细胞培养基中，剪成组织块。

8.如权利要求5所述的大鼠血管平滑肌细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤3中，任意相邻两个所述组织块之间的距离为3mm～5mm。

9.如权利要求5所述的大鼠血管平滑肌细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤4中，将所述细胞培养瓶竖向静置于37℃、5% CO₂饱和湿度的培养箱中。

10.如权利要求5所述的大鼠血管平滑肌细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤5中，培养四天后，第一次更换所述大鼠血管平滑肌细胞培养基，以后每隔五天更换一次所述大鼠血管平滑肌细胞培养基。