[发明专利]基于CRISPR-Cas13a系统特异性靶向F3-T3融合基因的crRNA及应用

说明书

本发明创造提供了基于CRISPR‑Cas13a系统特异性靶向F3‑T3融合基因的crRNA及应用，所述crRNA的序列如SEQID NO：1所示。本发明创造所述的crRNA介导的CRISPR‑Cas13a基因编辑系统能够明显抑制胶质瘤细胞增殖。

技术领域

本发明创造属于生物领域，尤其是涉及基于CRISPR-Cas13a系统特异性靶向F3-T3融合基因的crRNA及应用。

背景技术

Cas13a是一种RNA引导的CRISPR效应子，能靶向并切割单链RNA(ssRNA)，作为RNA病毒感染性疾病和恶性肿瘤的治疗和诊断工具，引起了极大的关注。CRISPR-Cas13a系统由两个部分组成，包括靶向RNA的CRISPR-RNA(crRNA)和由crRNA引导的RNA酶Cas13a。迄今为止，CRISPR-Cas13a系统被认为是一种在转录水平上直接抑制基因表达的方法。与Cas9相比，Cas13a提供了一种可能更安全的替代方案，因为它会导致功能表型丧失，但不会扰乱基因组。更加重要的是，Cas13a具有独特的“附带切割”效应：在识别其靶RNA后，活化的Cas13a不仅对靶RNA表现出切割作用，而且对非靶RNA也表现出切割作用。

FGFR3-TACC3(F3-T3)融合基因首次在胶质母细胞瘤样本中报道，已成为多种癌症的致癌驱动因子，包括尿路上皮癌、非小细胞肺癌、宫颈癌、头颈癌、胃肠道癌恶性肿瘤和恶性黑色素瘤。预计大约1.2-8.3％的GBM会携带这种染色体易位。编码FGFR3和TACC3的基因位于人类染色体4p16，相距48kb，代表恶性胶质瘤中最常见的FGFR-TACC染色体重排。FGFR-TACC融合是有效的癌基因，具有促生长作用并诱导非整倍性。但是，其细胞内信号通路尚不清楚。携带FGFR-TACC融合的肿瘤患者预后不良，死亡率高。目前，针对FGFR3-TACC3融合蛋白仅限于针对FGFRs的激酶抑制剂，这些小分子化合物是典型的多激酶抑制剂，靶向FGFR和其他酪氨酸激酶。因此，精确靶向FGFR3-TACC3将减少不良反应，对肿瘤的靶向治疗具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明创造旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种基于CRISPR-Cas13a系统特异性靶向F3-T3融合基因的crRNA及应用。

为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：

一种基于CRISPR-Cas13a系统特异性靶向F3-T3融合基因的crRNA，其序列如SEQIDNO：1所示。

一种应用上述crRNA介导的CRISPR-Cas13a基因编辑系统。

一种上述crRNA介导的CRISPR-Cas13a基因编辑系统在抑制癌细胞增殖或杀伤肿瘤细胞中的应用。

优选的，所述crRNA介导的CRISPR-Cas13a基因编辑系统通过触发旁效应引起RNA降解来抑制肿瘤细胞增殖或杀伤肿瘤细胞。

优选的，所述肿瘤细胞为胶质瘤细胞。

更优选的，所述胶质瘤细胞为胶质母细胞瘤细胞。

优选的，所述胶质瘤细胞为人胶质瘤细胞U87细胞或TBD0220细胞。

一种上述crRNA介导的CRISPR-Cas13a基因编辑系统在特异性靶向FGFR3-TACC3融合基因中的应用。

优选的，所述Cas13a基因在肿瘤细胞中的表达载体为慢病毒表达载体。

更优选的，所述慢病毒表达载体为p GV341。

相对于现有技术，本发明创造具有以下优势：

(1)本发明创造所述的crRNA介导的CRISPR-Cas13a基因编辑系统具有较高的目的基因敲低效率；