[发明专利]抗体以及包含其的结合剂、免疫吸附材料及其应用

说明书

本发明公开了一种抗体，其靶向包含如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的蛋白，所述抗体包含重链可变区，其包括如本发明所述的CDR1、CDR2和CDR3。本发明还提供了一种包含该抗体的结合剂、免疫吸附材料及其应用。本发明的抗体对包含如SEQ ID NO:1所示序列的蛋白分子的结合活性较好，并且具有较好的热稳定性和较好的耐碱性；包含其的结合剂、免疫吸附材料可在温和条件下纯化例如FSH、hCG、TSH、hLH、FSH‑CTP等包含如SEQ ID NO:1所示序列的蛋白分子，且纯化效率高，所得产物的纯度高、产物质量好、且纯化成本较低，使用方法也较为便捷、操作简单。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及抗体以及包含其的结合剂、免疫吸附材料及其应用。

背景技术

亲和层析是基于生物分子与其它配体分子之间(如抗原与抗体，酶和底物，激素与受体，核酸中的互补链，多糖与蛋白复合体等)的亲和吸附原理建立起来的。蛋白质与层析载体上的配体通过共价键、范德华力、疏水力、静电力等作用发生生物学专一性结合形成复合物，共价链接在载体表面的功能团配体上。蛋白质亲和层析技术通过目标蛋白质与配体间通过特异性亲和力吸附而达到分离纯化的目的，具有生物专一性的特点，纯化效率高。

目前亲和层析应用较多的比如ProA用于纯化抗体，镍柱用于纯化His标签蛋白。然而在药用重组蛋白上，考虑到安全性等问题，通常是不携带纯化标签的，因此其纯化难度较高，纯化过程中目的蛋白损失大。针对一些复杂蛋白的纯化，比如异二聚体蛋白FSH(卵泡刺激素)、hCG(人绒毛膜促性腺激素)、促甲状腺激素(TSH)、人促黄体生成素(hLH)、FSH-CTP(卵泡刺激素-CTP融合蛋白)等，蛋白本身不稳定容易解聚，也不耐酸碱，目前通常使用阴离子交换层析等纯化工艺。纯化步骤繁琐，且都是在不温和的pH条件下操作，纯化过程中损失较多，其得率均远低于亲和层析，一般低于50％，且纯度不高。目前市面上仅有一款进口商业化亲和层析的填料可用于纯化诸如FSH、hCG、TSH、hLH、FSH-CTP等包含α链(SEQ ID NO:1)的异二聚体蛋白，价格高，导致相应药品纯化成本高居不下。

因此，急需一种操作简单、纯化产物纯度高、纯化成本低的免疫吸附材料以及纯化方法，以高效、低成本的纯化诸如FSH、hCG、TSH、hLH、FSH-CTP等包含α链(SEQ ID NO:1)的异二聚体蛋白。

发明内容

本发明实际所要解决的技术问题是为了克服现有技术中纯化诸如FSH、hCG、TSH、hLH、FSH-CTP等包含α链(SEQ ID NO:1)的异二聚体蛋白时步骤繁琐、纯化效率低、损失较多、成本较高、所得产物的纯度较低等缺陷，本发明提供了一种抗体以及包含其的结合剂、免疫吸附材料及其应用。本发明的抗体对包含如SEQ ID NO:1所示序列的蛋白分子(例如FSH、hCG、TSH、hLH、FSH-CTP等)的结合活性较好，并且具有较好的热稳定性和较好的耐碱性；包含其的结合剂、免疫吸附材料可在温和条件(例如中性pH的条件)下纯化例如FSH、hCG、TSH、hLH、FSH-CTP等包含如SEQ ID NO:1所示序列的蛋白分子，且纯化效率高，所得产物纯度高、产物质量好、且纯化成本较低，使用方法也较为便捷、操作简单；此外，使用包含本发明抗体的结合剂、免疫吸附材料重复利用多次时仍然能够保持较佳性能。

为了解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一种抗体，其靶向包含如SEQ IDNO:1所示氨基酸序列的蛋白，所述抗体包含重链可变区(VHH)，所述VHH包含以下根据IMGT编号的CDR或其突变：氨基酸序列如SEQ ID NO:5或19所示的CDR1；氨基酸序列如SEQ IDNO:6或20所示的CDR2；和，氨基酸序列如SEQ ID NO:7或21所示的CDR3。

其中上述突变为在所述CDR的氨基酸序列上具有3、2或1个氨基酸插入、缺失或替换。