[发明专利]趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法

说明书

本发明利用林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811静息细胞为催化剂，通过催化1‑(4‑三氟甲基苯基)乙酮生物还原制备(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇，为不同种类微生物催化制备趋化因子CCR 5拮抗剂AD101关键手性中间体(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇方面提供了有益的参考；本发明利用生物催化方法得到产物(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇，与已报道的化学合成路线相比，该工艺的过程简单，环境友好，生物催化剂为微生物菌体，成本低廉。

(一)技术领域

本发明涉及一种趋化因子CCR 5拮抗剂AD101关键手性中间体(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的生物制备方法。

(二)背景技术

(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的化学结构式为：

(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇是合成药物CCR5拮抗剂AD101的关键手性中间体。AD101(SCH-350581)是一种趋化因子CCR5拮抗剂，其分子式为：C₂₈H₃₇F₃N₄O。CCR5是一种细胞膜蛋白，为趋化因子受体的一种亚型，其属G蛋白偶联受体家族，它是HIV侵染靶细胞过程中主要辅助受体之一，主要通过阻断HIV-1病毒与细胞膜蛋白结合，达到抑制HIV-1病毒的侵入感染免疫细胞，是一种抗艾滋病新药。此外，(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇还可用于合成DP1受体拮抗剂。近年来，DP1拮抗剂已被应用于治疗烟酸所致的冲洗不良反应。

目前催化1-(4-三氟甲基苯基)乙酮还原制备光学纯(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的方法主要有化学法和生物法。Tagat等采用手性催化剂恶唑硼烷，通过BH₃Me₂S不对称还原合成(R)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇，该化学制备方法需使用昂贵的手性试剂，并且存在环境问题。利用游离酶或微生物全细胞通过生物催化法也可制备得到(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇。吴中柳等通过PCR技术从金黄杆菌CA49(Chryseobacterium sp.CA49)基因组中克隆获得羰基还原酶ChKRED20，利用其催化还原10mM的1-(4-三氟甲基苯基)乙酮制备(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇，尽管该法的产物选择性较高，但酶分离纯化过程复杂，且催化过程中需要外加辅酶。利用微生物全细胞催化法制备不仅反应条件温和、环境友好，而且操作简单，成本低廉。

(三)发明内容

为了解决现有技术产物选择性低、酶的分离纯化过程复杂等问题，本发明提供一种趋化因子CCR 5拮抗剂AD101关键手性中间体(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的生物制备方法，特别是利用林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811全细胞生物催化制备(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，所述的方法为：以林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811菌株发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以1-(4-三氟甲基苯基)乙酮为底物，以pH值6.0-8.0的磷酸盐缓冲液为反应介质构成转化体系，在25-50℃，150-250rpm条件下进行转化反应4-48h(优选30-40℃、200rpm条件下转化24h)，反应结束后，向转化液中加入与转化液等体积的乙酸乙酯终止反应并萃取，离心后取上清液，即可获得含所述趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的乙酸乙酯萃取液，所述趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体即(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇产物；其中，所述湿菌体的用量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为50～500g/L(优选200g/L)，所述1-(4-三氟甲基苯基)乙酮的质量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为0.5～6g/L(优选1.88g/L)；