[发明专利]一种靶向革兰氏阴性菌的富脯氨酸抗菌肽Pyr-2及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种靶向革兰氏阴性菌的富脯氨酸抗菌肽Pyr‑2及其制备方法与应用，抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。将天然抗菌肽Pyrrhocoricin中第2‑10位氨基酸为核心序列，利用脯氨酸分别对序列中第4、5位的甘氨酸和丝氨酸进行替换，增加脯氨酸的数量，提高疏水性；使用精氨酸对第11位的苏氨酸进行替换，增加了多肽的正电荷数，从而提高多肽的抗菌活性。抗菌肽Pyr‑2在制备治疗革兰氏阴性菌引发的感染性疾病药物中的应用。本发明的抗菌肽Pyr‑2对红细胞几乎没有溶血，有很好的生物相容性。综上所述，本发明的Pyr‑2具有成为特异性抗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物的潜力，有很高的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向革兰氏阴性菌的富脯氨酸抗菌肽Pyr-2及其制备方法与应用。

背景技术

在过去几十年，抗生素的滥用导致细菌耐药性不断变强，产生耐药性的细菌数量也日益变多，为防止这些细菌的传播与感染，开发新的、能够取代抗生素的药物成为了人们近些年迫切需要解决的问题。抗菌肽(AMPs)是一类具有广谱抗菌性的多肽类物质，是先天免疫系统中重要组成成分；存在范围广泛，在动物、植物中均发现其存在。与抗生素相比，抗菌肽具有无毒副作用(仅小部分对细胞具有溶血性)、不易产生耐药性、使用无残留、对环境无污染等优点逐渐成为取代抗生素的首要选择。

抗菌肽的抑菌机理一直是人们研究的热切话题。就目前而言，无论是已发现的天然存在的抗菌肽还是人工合成的抗菌肽，研究较多的均是抗菌肽通过破坏细菌细胞膜来发挥抑菌作用，但这种作用方式可能导致抗菌肽的特异性差，对机体正常细胞产生一定的毒性。近些年的研究发现，抗菌肽杀菌方式不仅是作用于细菌细胞膜，一些抗菌肽可跨膜进入细胞内部，与胞内核酸和蛋白质上的特定靶点相互作用，通过对基因转录、翻译和表达的调控，或者抑制胞内特定蛋白质的功能发挥从而抑制或杀死细菌。天然抗菌肽Pyrrhocoricin是一种存在于昆虫体内的富脯氨酸抗菌肽，靶向作用于细菌核糖体，仅对革兰氏阴性菌有抑菌活性，但该肽溶血活性较高，且合成过程复杂，导致合成成本高昂，较高的合成难度使其在生产应用上产生了很大的局限性。

发明内容

基于以上不足，本发明提供一种靶向革兰氏阴性菌的富脯氨酸抗菌肽Pyr-2，该抗菌肽是一种通过作用于细菌细胞内，靶向抑制革兰氏阴性菌的富脯氨酸抗菌肽，对红细胞几乎没有溶血。

本发明所采用的技术方案如下：一种靶向革兰氏阴性菌的富脯氨酸抗菌肽Pyr-2，其序列如SEQ ID No.1所示。

本发明的另一目的是还公开一种靶向革兰氏阴性菌的富脯氨酸抗菌肽Pyr-2的制备方法，步骤如下：

(1)天然抗菌肽Pyrrhocoricin中第2-10位氨基酸为核心序列，对多肽的抗菌活性及靶向性有很大的影响。利用脯氨酸分别对序列中第4、5位的甘氨酸和丝氨酸进行替换，增加脯氨酸的数量，提高疏水性；使用精氨酸对第11位的苏氨酸进行替换，增加了多肽的正电荷数，进而提高多肽的抗菌活性；

(2)采用固相化学合成法，使用多肽合成仪合成如SEQ ID No.1所示的肽树脂，然后经过三氟乙酸切割；

(3)经过反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化，然后经过质谱(MS)鉴定，即完成抗菌肽Pyr-2的制备。

本发明的另一目的是提供一种靶向革兰氏阴性菌富脯氨酸抗菌肽Pyr-2在制备治疗革兰氏阴性菌引发的感染性疾病药物中的应用。

如上所述的革兰氏阴性菌包括大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌。