[发明专利]一种体积排阻色谱法测定玻璃酸钠分子量与分子量分布的方法

说明书

本发明提供了一种体积排阻色谱法测定玻璃酸钠分子量与分子量分布的方法，涉及玻璃酸钠测试技术领域。本发明采用SEC法，由高效液相色谱进行普适校正计算三次函数回归方程，进行玻璃酸钠分子量与分子量分布测定，采用6种不同分子量(重均分子量分别为5.4万～6.6万、12.6万～15.4万、23.4万～28.6万、59.4万～72.6万、90万～110万和180万～220万)系列的聚苯乙烯磺酸钠对照品，用多项式拟合得到一元三次普适校正方程，可以有效避免个别点的波动导致整体数据无法重现的问题，并且一元三次方程可以防止过拟合问题，从而有效提升测量数据的准确性、重现性和稳定性。

技术领域

本发明涉及玻璃酸钠测试技术领域，具体涉及一种体积排阻色谱法测定玻璃酸钠分子量与分子量分布的方法。

背景技术

玻璃酸钠(Sodium hyaluronate，SH)是广泛存在于动物组织细胞间质中的一种酸性黏多糖，其结构为葡糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖双糖单位重复连接，平均相对分子质量为10⁵～10⁷。不同分子量的SH，其药理作用有很大差别，高分子量SH(相对分子质量120万～200万)具有高度的黏弹性和润滑性，可作为黏弹性保护剂用于眼科手术和关节腔内注射治疗类风湿关节炎和骨关节炎，平均相对分子质量越高疗效越好；较低平均相对分子质量的SH(相对分子质量70万～120万)则更易被机体吸收，可作为天然保湿因子用于化妆品和美容保健食品领域；更低的平均相对分子质量的SH(相对分子质量低于70万)还有促进骨生成、治疗细菌性角膜溃疡以及抗肿瘤等疗效。因此，准确测定SH的平均相对分子质量是控制SH质量的重要指标之一。

玻璃酸钠滴眼液化学名称：[→3)-2-乙酰氨-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖-(1→)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-(1→]n，英文名称：Sodium Hyaluronate Eye Drops。

目前，玻璃酸钠分子量与分子量分布常用的测定方法有黏度法、分子排阻色谱(SEC)法以及多角度激光光散射仪与分子排阻色谱联用(MALLS-SEC)法等。其中，SEC法根据溶液中分子体积大小实现分离，具有快速、简便和不受杂质干扰等优点，应用较为广泛。但是，SEC法需用系列对照品进行普适校正计算回归方程后进行计算，如果对照品选用不合适或者校正曲线计算不准确会导致计算出的样品结果出现较大差异，影响测试结果的重现性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种体积排阻色谱法测定玻璃酸钠分子量与分子量分布的方法，本发明提供的方法测试结果的重现性和稳定性好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了体积排阻色谱法测定玻璃酸钠分子量与分子量分布的方法，包括以下步骤：

(1)提供系列对照品溶液；所述系列对照品为重均分子量分别为5.4万～6.6万、12.6万～15.4万、23.4万～28.6万、59.4万～72.6万、90万～110万和180万～220万的聚苯乙烯磺酸钠盐；

(2)将所述系列对照品溶液进行液相色谱分析，得到保留时间；根据保留时间依据Mark-Houwink方程进行普适校正计算保留时间-重均分子量，得到一元三次普适校正方程；

(3)提供玻璃酸钠供试品溶液；将所述玻璃酸钠供试品溶液进行液相色谱分析，得到保留时间；根据所述保留时间和一元三次普适校正方程计算所述玻璃酸钠的分子量与分子量分布。

优选的，所述一元三次普适校正方程为Y＝-0.0007X³-0.0071X²+0.3081X+6.7753，所述一元三次普适校正方程的相关系数R为0.9998；