[发明专利]过表达CTLA-4Ig/PD-L1的宫内膜干细胞在制备治疗肺纤维化的药物中的应用

权利要求书

1.过表达CTLA-4Ig/PD-L1的宫内膜干细胞在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述过表达CTLA-4Ig/PD-L1的宫内膜干细胞的构建方法，包括以下步骤：

1)提取动物脾脏的RNA，经反转录得到cDNA；

2)以所述cDNA为模板，分别扩增CTLA-4Ig基因和PD-L1基因，得到CTLA-4Ig基因片段和PD-L1基因片段；

3)将所述CTLA-4Ig基因片段和PD-L1基因片段克隆至pLenti CMV GFP Puro(658-5)载体上，得到重组载体pLenti CMV CTLA-4Ig IRES PD-L1 Puro；

4)将所述重组载体pLenti CMV CTLA-4Ig IRES PD-L1 Puro、PMD2和PSPAX2混合，在转染试剂的作用下处理真核细胞，经培养，收集上清；

5)将所述上清感染宫内膜干细胞，经细胞培养得到过表达CTLA-4Ig/PD-L1的宫内膜干细胞。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤2)中所述扩增CTLA-4Ig基因的引物为核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物；

扩增PD-L1基因的引物为核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的反向引物。

4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤4)中所述重组载体pLenti CMV CTLA-4Ig IRES PD-L1 Puro、PMD2和PSPAX2的质量比为3：1.5～2.5：2.5～3.5。

5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤5)中所述宫内膜干细胞选自原代至第十代的宫内膜干细胞中任意一代。

6.根据权利要求2～5任意一项所述应用，其特征在于，步骤5)中所述感染在转染增强剂的作用下进行；所述转染增强剂包括polybrene试剂。

7.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述肺纤维化包括由药物诱导所致的肺纤维化；

所述药物包括博来霉素和/或脂多糖。

8.根据权利要求1或7所述应用，其特征在于，所述药物包括注射剂；所述注射剂为含过表达CTLA-4Ig/PD-L1的宫内膜干细胞的氯化钠溶液；

所述氯化钠溶液的质量体积百分比为0.8％～1.0％。

9.一种用于预防和/或治疗肺纤维化的细胞制剂，其特征在于，包括含过表达CTLA-4Ig/PD-L1的宫内膜干细胞的氯化钠溶液；

所述氯化钠溶液的质量体积百分比为0.8％～1.0％。

10.根据权利要求9所述细胞制剂，其特征在于，所述过表达CTLA-4Ig/PD-L1的宫内膜干细胞的密度为2.0×10⁵～4.0×10⁵个/mL。