[发明专利]共表达IL-21和hrCD16嵌合受体的免疫细胞及其应用

权利要求书

1.一种组合，所述组合包含免疫细胞和肿瘤抗原靶向抗体，其特征在于，所述免疫细胞共表达IL-21和hrCD16嵌合受体；

其中，所述hrCD16嵌合受体包含：

（1）胞外识别域；

（2）胞外间隔区；

（3）跨膜区；和

（4）胞内信号传导结构域；

所述嵌合受体还包含：

（5）一个或多个共刺激信号传导结构域；

其中，所述胞外识别域为特异性结合抗体Fc片段的突变型hrCD16胞外识别域，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示；所述胞外间隔区的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示；所述跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示；所述共刺激信号传导结构域的氨基酸序列如SEQID NO: 4所示；所述胞内信号传导结构域氨基酸序列如SEQ ID NO: 5所示；所述肿瘤抗原靶向抗体为GPC3肿瘤抗原靶向抗体；所述IL-21的氨基酸序列如SEQ ID NO: 7所示；所述免疫细胞为T细胞。

2.如权利要求1所述的组合，其特征在于，所述嵌合受体还包含一个或多个细胞因子受体信号传导结构域。

3.如权利要求1所述的组合，其特征在于，所述T细胞选自未经分选纯化的T细胞和分选纯化的T细胞。

4. 如权利要求1所述的组合，其特征在于，所述T细胞选自分选纯化的PD-1⁺ T细胞、分选纯化的CD137⁺ T细胞、分选纯化的CD160⁺ T细胞、分选纯化的纯真T细胞（T_naive）、分选纯化的中央记忆型T细胞（T_CM）、分选纯化的效应记忆型T细胞（T_EM）、分选纯化的效应T细胞（T_EMRA）、分选纯化的过渡记忆型T细胞（Transitional Memory T cells，T_TM）和分选纯化的组织记忆型T细胞（Tissue residential memory T cells，T_RM）。

5.如权利要求2所述的组合，其特征在于，所述细胞因子受体信号传导结构域选自以下任何一种或多种信号传导结构域：IL-2R、IL-7R、IL-15R、IL-18R、IL-21R、IL-23R及其组合。

6. 如权利要求1所述的组合，其特征在于，所述hrCD16嵌合受体的氨基酸序列如SEQID NO: 6所示。

7.如权利要求1所述的组合，其特征在于，所述IL-21是分泌型或膜型IL-21。

8.如权利要求1所述的组合，其特征在于，所述IL-21是组成性表达或诱导性表达。

9. 如权利要求1所述的组合，其特征在于，所述免疫细胞中的IL-21和hrCD16嵌合受体由如SEQ ID NO: 8所示的核苷酸序列的多核苷酸编码。

10.如权利要求9所述的组合，其特征在于，所述多核苷酸包含在载体中。

11.如权利要求10所述的组合，其特征在于，所述载体选自质粒、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、痘病毒载体、疱疹病毒载体、转座子及其组合。

12.如权利要求11所述的组合，其特征在于，所述载体为慢病毒载体。

13.如权利要求1-12中任一项所述的组合在制备用于治疗肝癌的药物中的用途。

14.如权利要求1-12中任一项所述的组合，其特征在于，所述免疫细胞的制备方法包括如下步骤：

1）获取所述的免疫细胞中的IL-21和hrCD16嵌合受体的核酸序列；

2）将IL-21和hrCD16嵌合受体的核酸序列克隆至慢病毒表达载体中，获得hrCD16-IL-21慢病毒表达质粒；

3）将表达质粒、骨架质粒和包膜质粒共转染至HEK293T细胞，包装并获得慢病毒颗粒，经离心浓缩后获得慢病毒浓缩液；

4）将慢病毒转导免疫细胞，从而获得共表达IL-21和hrCD16嵌合受体的免疫细胞。