[发明专利]一种串联表达的口蹄疫病毒VLP亚单位疫苗

权利要求书

1.一种口蹄疫病毒VLP疫苗，其特征在于，由融合片段A-O-VLP-3Cmutan在表达体系中表达形成，所述表达系统选自大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、植物或者哺乳动物细胞中的任一种。

2.如权利要求1所述的VLP疫苗，其特征在于，所述A-O-VLP-3Cmutant具有如序列表中Seq ID NO.3所示的核苷酸序列；A-O-VLP-3Cmutant氨基酸序列推导得到的氨基酸序列如序列表Seq ID NO.7所示；所述表达体系为SF9真核表达系统。

3.一种口蹄疫病毒VLP疫苗的制备方法，其特征在于，通过口蹄疫病毒A型的A-P12A基因和O型的O-P12A3C-mutant基因，制得融合片段A-O-VLP-3Cmutant，再经表达体系中表达形成。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述O-P12A3C-mutant基因是将O-P12A和O-3C-mutant进行融合PCR而获得，其中的O-P12A和O-3C-mutant分别具有如序列表中Seq IDNO.4、Seq ID NO.5所示的核苷酸序列。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的O-3C-mutant是由O-3C的第127个氨基酸由L变为P而获得，其中的3C具有如序列表Seq ID NO.6所示的核苷酸序列。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述A-P12A、O-P12A3C-mutant、A-O-VLP-3Cmutant具有如序列表中Seq ID NO.1、Seq ID NO.2、Seq ID NO.3所示的核苷酸序列。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的A-O-VLP-3Cmutant经表达体系表达制备VLP，是通过pFast-A-O-VLP-3Cmutant转入DH10bac感受态细胞，进行重组、筛选、鉴定，得到Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant质粒，再转入表达体系，所述表达系统选自大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、植物或者哺乳动物细胞中的任一种。其A型结构蛋白P1和O型结构蛋白P1以及3C蛋白酶中间均使用来自口蹄疫病毒的顺式裂解元件2A蛋白酶进行分离，共用一个3C蛋白酶进行酶切形成VP4、VP3、VP2、VP1四种结构蛋白，并组装成VLP。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述表达体系为SF9真核表达系统；A-O-VLP-3Cmutant经SF9真核表达系统表达的氨基酸序列如序列表中Seq ID NO.7所示。

9.如权利要求3～8任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备口蹄疫病毒A型的A-P12A基因和O型的O-P12A3C-mutant基因；

2)pFast载体与A-P12A酶切连接获得pFast-A-P12A；

3)pFast-A-P12A与O-P12A3C-mutant酶切连接获得pFast-A-O-VLP-3Cmutant；

4)pFast-A-O-VLP-3Cmutant转入DH10bac感受态细胞，得到Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant质粒；

5)Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant转入SF9真核表达系统，收获重组杆状病毒。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，收获的重组杆状病毒还需扩增，裂解，再经过分子筛过柱纯化。