[发明专利]表面增强拉曼散射结合免疫层析技术检测布鲁氏杆菌方法

说明书

本发明属于布鲁氏杆菌检测技术领域，公开了一种表面增强拉曼散射结合免疫层析技术检测布鲁氏杆菌方法，所述表面增强拉曼散射结合免疫层析技术检测布鲁氏杆菌方法包括：进行鲁氏杆菌抗体分组；制备纳米材料；制备SERS标记检测探针；制备拉曼免疫层析试纸条；进行试纸条性能检测。本发明提供的表面增强拉曼散射结合免疫层析技术检测布鲁氏杆菌方法，将拉曼增强技术与免疫层析技术相结合，制备出布鲁氏杆菌拉曼免疫层析试纸条，该试纸条灵敏度高、特异性强、使用方便快捷，在临床快速诊断中具有极大的推广和应用价值。同时，本发明方法操作简便、灵敏度高，15min内即可完成检测，在布鲁氏杆菌早期感染检测中具有广阔的应用和推广前景。

技术领域

本发明属于布鲁氏杆菌检测技术领域，尤其涉及一种表面增强拉曼散射结合免疫层析技术检测布鲁氏杆菌方法。

背景技术

目前，布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的，是目前世界上流行较广、危害较大的人畜共患病，引起流产、不孕以及各种组织的局部病灶。布鲁氏菌可通过鼻、咽、口腔感染，主要是通过粘膜上皮组织浸入。目前，布鲁氏菌属已有10余个种的布鲁氏菌存在，不同种的布鲁氏菌具有明显的宿主危害倾向性，但大多具有不同宿主间的交叉感染能力，可引起严重的公共卫生问题。随着我国近年来，畜牧业的快速发展，布鲁氏菌病成为了限制我国畜牧业发展的严重病害之一。

布鲁氏菌包括羊群布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌、猪种布鲁氏菌等种源。布鲁氏菌检测技术主要有虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、乳环试验(MRT)、补体结合试验(CFT)、ELISA和PCR等方法。常规方法分离鉴定病原所需条件苛刻，且费力、费时、危险性高、成功率低。PBT和SAT特异性不高、敏感性低；CFT操作繁琐，实验条件和技术水平要求高，实践应用极为不便。PCR检测方法较前几种快速也准确许多，但需要复杂的仪器设备，成本高，不适合基层和现场检测。表面增强拉曼散射(surface enhanced Raman scatterimg，SERS)是一种振动光谱技术，该技术灵敏度高、特异性强，将SERS与免疫层析技术结合是当前病原检测的重要研究方向之一。因此，针对这一现状，在布鲁氏杆菌检测工作中，亟需实现将SERS与免疫层析技术结合，并建立一种高灵敏度SERS-免疫层析检测新技术，以快速、准确且定量检测布鲁氏杆菌的方法。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：常规方法分离鉴定病原所需条件苛刻，且费力、费时、危险性高、成功率低；其中，PBT和SAT特异性不高、敏感性低；CFT操作繁琐，实验条件和技术水平要求高，实践应用极为不便；PCR检测方法需要复杂的仪器设备，成本高，不适合基层和现场检测。

解决以上问题及缺陷的难度为：传统技术缺陷难度主要是：耗时长；操作技术水平要求高，需要配备专业的实验室技术人员；需要复杂昂贵的仪器设备；不能进行现场的快速检测。

解决以上问题及缺陷的意义为：检测快速、准确，操作简单，无需专业人员，不需经过特殊培训，适合在基层现场进行快速检测，大大方便基层兽医工作开展。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种表面增强拉曼散射结合免疫层析技术检测布鲁氏杆菌方法。

本发明是这样实现的，一种表面增强拉曼散射结合免疫层析技术检测布鲁氏杆菌方法，所述表面增强拉曼散射结合免疫层析技术检测布鲁氏杆菌方法包括以下步骤：

步骤一，进行鲁氏杆菌抗体分组；

步骤二，制备纳米材料；

步骤三，制备SERS标记检测探针；

步骤四，制备拉曼免疫层析试纸条；

步骤五，进行试纸条性能检测。

进一步，步骤一中，所述鲁氏杆菌抗体分组，包括：

将获得的一对鲁氏杆菌抗体所包含的鲁氏杆菌标记抗体和鲁氏杆菌捕获抗体两个鲁氏杆菌抗体进行独立存放备用。