[发明专利]一种利用低共熔溶剂提取银耳多糖的方法

说明书

本发明公开了一种利用低共熔溶剂提取银耳多糖的方法。本发明的提取方法包括：将冻干银耳孢子发酵液与上述低共熔溶剂混合；然后将混合物水浴提取，经离心，得到银耳多糖浸提液；向银耳多糖浸提液中加入溶剂，经混匀、静置、离心，取沉淀物经洗涤、离心、冻干，得到银耳多糖。所述低共熔溶剂包括氢键供体、氢键受体及去离子水，所述氢键供体为甘油，所述氢键受体为氯化胆碱。本发明利用低共熔溶剂法提取银耳多糖，低共熔溶剂合成方法是氯化胆碱和甘油经过加热后，以氢键结合到一起形成低共熔溶剂，作为一种溶剂用于萃取银耳孢子发酵液中的银耳多糖，具有可操作性强，工艺简便，成本低的优点，同时原料易获取、可再生、可降解、可回收。

技术领域

本发明涉及一种利用低共熔溶剂提取银耳多糖的方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

多糖是一种高分子的聚合物,由成千上万个单糖通过糖普键连接而成。多糖广泛分布于自然界，植物、动物、微生物体内均有存在。天然多糖可用于临床试验，如抗糖尿病、抗肿瘤、降血脂等病症的治疗或者作为抗炎、抗病毒的药物，多糖对于维持人体正常运行具有重要的作用。

银耳(Tremella fuciformis)，又称“银耳菇”，它属于银耳目和银耳科，是一种可食用菌。银耳多糖是主要活性成分，主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和鼠李糖组成，具有抗氧化、抗肿瘤、抑制炎症等多种生理活性。发酵方法可以通过培养基组成和其他因素来丰富多糖的成分和分子量。发酵银耳多糖相比于传统子实体提取银耳多糖分子量更小，活性更强。银耳多糖无毒无害，具有很高的应用价值。

低共熔溶剂(DESs)通常是由氢键受体(通常是氯化胆碱)和氢键供体(通常是天然植物基有机离子，如氨基酸、有机酸、糖等)组成的共晶混合物。DESs的成分不仅能够通过氢键相互结合，而且能够提供或接受外部电子或质子以形成氢键。氢键受体通常采用季铵盐，如便宜可得、易降解、无毒的氯化胆碱，而氢键受体则可选择尿素、乙二醇、丙三醇、草酸、乳酸、葡萄糖、甘油等。在将两种化合物混合过程中由于阴离子和氢键供体之间形成的氢键引发电荷的离域，导致低共熔溶剂的熔点低于各组分化合物的熔点。低共熔溶剂相较于其他离子液体具有价格低廉，容易获取等优点。

目前，采用低共熔溶剂从银耳孢子发酵液中提取银耳多糖的研究尚未见报道。

发明内容

本发明解决的技术问题是：如何通过一种简单、高效、绿色环保的方法提取得到高纯度的银耳多糖。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种利用低共熔溶剂提取银耳多糖的方法，包括以下步骤：

步骤1：以甘油为氢键供体，氯化胆碱为氢键受体，加入去离子水配制低共熔溶剂；

步骤2：将冻干银耳孢子发酵液与步骤1配制得到的低共熔溶剂混合，然后在80℃水浴中提取，经离心，得到银耳多糖浸提液；

步骤3：向银耳多糖浸提液中加入溶剂，经混匀、静置、离心，取沉淀物经洗涤、离心后，将沉淀加入蒸馏水中，水浴提取后采用透析袋透析，然后再次离心，收集上清液，将上清液冻干后获得银耳多糖。

优选地，其特征在于，所述步骤1中的氢键受体、氢键供体与去离子水的摩尔比为1：1～3：40～80。

优选地，所述步骤1中低共熔溶剂的配制方法为：将氢键受体、氢键供体与水混合，于80℃水浴下搅拌至澄清透明，放置一段时间后，溶液无晶体析出，得到低共熔溶剂。

优选地，所述步骤2中银耳孢子发酵液与低共熔溶剂的比例为1～5g:10～50mL。

优选地，所述步骤3中的溶剂为乙醇，所述乙醇的体积浓度为95％。

优选地，所述步骤3中银耳多糖浸提液与溶剂的体积比为1:4。

优选地，所述步骤3中蒸馏水的体积与步骤2中的冻干银耳孢子发酵液的质量之比为100mL：1g。