[发明专利]一株贝雷斯芽孢杆菌在水产品肝素提取中的应用

说明书

本发明提供了一株提高水产品肝素提取率的贝雷斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）HL‑5的应用，所述贝雷斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）HL‑5于2018年7月2日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：60403。该菌株应用于贝类肝素的提取中，相对于传统的酶解方法，肝素提取率提高了10.55%～72.07%。贝雷斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）HL‑5有较强的产脂肪酶与蛋白酶的能力，在水产品肝素的提取中有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株提高水产品肝素提取率的贝雷斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）HL-5及其应用。

背景技术

肝素是由葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸等交替组成的一种酸性粘多糖，具有较高含量的硫酸基，是已知负电荷密度最高的生物大分子，具有良好的抗凝血作用，是临床使用最广泛的抗凝血剂。近年来，有研究还发现肝素具有降血脂、抗炎、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、抑制细菌黏附等作用，是重要的粘多糖类生化药物之一。

一般而言，肝素来源于猪、牛、羊的小肠黏膜提取物，也存在于动物的血管壁和肺之中，但由于受到肝素污染事件、疯牛病和宗教信仰的影响，陆地哺乳动物源肝素的开发受到限制，有学者提出从相对洁净的海洋生物中寻找肝素新资源以替代陆地动物原料。海洋占地球表面积的71%以上，庞大的生物库及其独特的环境，造就了其丰富的生物资源。近年来，从海洋生物中寻找肝素来源的替代原料的研究日益增多，已有报道从海湾扇贝、多种海藻和海洋细菌、虾、红树林蟹、金枪鱼、青口和文蛤等多种海洋生物中提取得到肝素。

酶解法是提取肝素常用的方法之一。蛋白酶能够破坏肝素与蛋白质共价结合的糖肽键，从而将肝素从肝素-蛋白复合物中分离出来，也可将杂蛋白分解为小分子肽。最后通过调节pH，热变性和盐析除去酶蛋白和被降解的蛋白质制得肝素/类肝素。

例如，专利CN201710419627.4公开了一种复合酶提取肝素的方法，通过使用碱性蛋白酶和胰蛋白酶的复合酶进行酶解提取肝素，并将提取液浓缩过滤后，使用树脂进行吸附，然后洗脱沉淀，干燥得到肝素钠粗品，再将所制得的肝素钠粗品经进一步精制后，得到高纯度的肝素钠产品，该方法从猪小肠粘膜中提取肝素，能够提高酶解效率，同时提高肝素钠粗品的产率。还有，专利CN200910071972.9公开了一种肝素的提取、分离、纯化方法，通过蛋白酶水解法、超声波辅助盐析法、离子交换树脂吸附法从猪小肠粘膜中分离和纯化肝素，该方法的肝素提取率达到了230.81mg/kg，比传统方法提高了40%。另有，专利CN201811378238.2公开了一种贝类肝素及其制备方法，其采用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶，通过酶解法从贝类中提取获得肝素。

需要指出的是，不论是猪小肠粘膜还是贝类，都含有一定量的与蛋白质结合在一起的脂肪，上述方法均难以实现脂肪与蛋白质的彻底分离。而现有的酶解法提取肝素只关注蛋白的酶解，忽略了脂肪的酶解。这些脂肪的存在阻止了蛋白酶对蛋白的深度酶解，从而使得蛋白酶解的不彻底，影响了类肝素的提取率。现有技术中也未见报道能够解决此问题的方法，因此本专利发明人针对该问题进行深入的试验研究具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于解决采用现有技术无法实现蛋白与脂肪的分离，造成现有酶解法制备肝素提取率较低、成本较高的问题。